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谷氨酸(glutamic acid,Glu)含量測定試劑盒說明書

時間:2025/1/9閱讀:653
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谷氨酸(glutamic acidGlu)含量測定試劑盒說明書

微量法 100 /96 

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義:

Glu 廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,不僅是組成蛋白質(zhì)的 20 種氨基酸之一,而且通過轉(zhuǎn)氨基作用參與多種氨基酸合成,是生物體內(nèi)主要氨基來源之一。此外,Glu 還是wei精的主要有效成分,常用做食品添加劑以及香料生產(chǎn)。

測定原理:

利用專用提取液提取,然后用顯色劑進(jìn)行顯色,顯色后在 570nm 下進(jìn)行測定。

組成:

 

產(chǎn)品名稱

BH6004-100T/96S

Storage

試劑一:液體

120ml

4

試劑二:粉劑

1

4

說明書

1 

 

試劑二臨用前加入 5ml 蒸餾水充分溶解混勻,用不完的試劑仍 4℃保存。

自備儀器和用品:

可見分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰、蒸餾水。

谷氨酸提取:

1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞樣品:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個):試劑一體積(ml 500~10001 的比例(建議 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1ml 試劑一),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);8000g 常溫離心 10min,取上清,置冰上待測。

2、組織樣品:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(ml) 15~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入1ml 試劑一),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 常溫離心 10min,取上清,置冰上待測。

3、血清(漿)或細(xì)胞培養(yǎng)液樣品:按照血清(漿)或細(xì)胞培養(yǎng)液體積(ml):試劑一體積(ml) 15~10 的比例(建議取 0.1ml 血清(漿)或者細(xì)胞培養(yǎng)液加入 1ml 試劑一),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 常溫離 10min,取上清,置冰上待測。

測定步驟:

1、分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長至 570nm,蒸餾水調(diào)零。

2、在有蓋EP 管中加入下列試劑:

試劑名稱μl

測定管

對照管

樣本

250


試劑一


250

試劑二

50

50

混勻,90℃水浴 20min(蓋緊,以防止水分散失),流水冷卻,取 200uL 至微量石英比色皿或 96 板中,于 570nm 波長處記錄吸光值A。A=A 測定管-A 對照管。對照管只要做一管。

谷氨酸含量計算:

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測定回歸方程為y = 0.0074x- 0.5255;x 為谷氨酸含量(µg/ml),y 為吸光值。

2、按照血清(漿)或者細(xì)胞培養(yǎng)液體積計算

谷氨酸含量(μg/ml)= [(A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(V3×V1÷V2=1351×(A+0.5255)

3、按照蛋白濃度計算

谷氨酸含量(µg/mg prot)=[(A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(V1×Cpr)=135.1×(A+0.5255) ÷Cpr

4、按照樣本質(zhì)量計算

谷氨酸含量(µg/g 鮮重)=[(A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(W ×V1÷V2)=135.1×(A+0.5255) ÷W

5、按照細(xì)菌或細(xì)胞密度計算

谷氨酸含量(μg/104 cell)=[(A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(500×V1÷V2)=0.27×(A+0.5255)

V1:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.25ml;V2:加入提取液體積,1 ml;V3:加入血清(漿)或細(xì)胞培養(yǎng)液體積,0.1 ml; Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/ml;W:樣本質(zhì)量,g500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500 萬。

b.  96 孔板測定的計算公式如下

1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測定回歸方程為y = 0.0037x- 0.5255; x 為谷氨酸含量(µg/ml),y 為吸光值。

2、按照血清(漿)或者細(xì)胞培養(yǎng)液體積計算

谷氨酸含量(μg/ml)= [(A +0.5255)÷0.0037×V1]÷(V3×V1÷V2=2703×(A+0.5255)

3、按照蛋白濃度計算

谷氨酸含量(µg/mg prot)=[(A +0.5255)÷0.0164×V1]÷(V1×Cpr)=270.3×(A+0.5255) ÷Cpr

4、按照樣本質(zhì)量計算

谷氨酸含量(µg/g 鮮重)= [(A +0.5255)÷0.0164×V1]÷(W ×V1÷V2)=270.3×(A+0.5255) ÷W

5、按照細(xì)菌或細(xì)胞密度計算

谷氨酸含量(μg/104 cell)=[(A +0.5255)÷0.0164×V1]÷(500×V1÷V2)=0.541×(A+0.5255)

V1:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.25ml;V2:加入提取液體積,1 mlV3:加入血清(漿)或細(xì)胞培養(yǎng)液體積,0.1 ml; Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/ml;W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500 萬。

注意:

1、該試劑盒僅適用于發(fā)酵液或組織中谷氨酸含量測定,檢測下限為 100µg/ml。

2、標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍為:100µg/ml -600µg/ml。

3、ΔA 線性范圍為:0.01-1;若大于 1 則需要將上清液用試劑一稀釋至適當(dāng)倍數(shù)后測定,計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。


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