鎳柱純化原理：過渡金屬通過與電子供體配基上，能與金屬離子相互作用的羧基或氨基的電負(fù)性元素（O，N），形成較穩(wěn)定的金屬螯合物。在IMAC中，一個Ni2+有六個配位位點，被含有3，4或5個電子供體基團（配位位點）的螯合物固定在吸附劑上，而剩下未被占據(jù)的位點暴露于溶液中，能與一些氨基酸的側(cè)鏈或His標(biāo)簽的蛋白特異性結(jié)合。

在Ni柱的使用中，應(yīng)當(dāng)避免緩沖液中存在還原劑和螯合劑，以免Ni2+被還原而脫落。如果柱料使用太久積累了很多雜蛋白，可用EDTA將Ni2+螯合下來，再用NaOH清洗柱料后，重新螯合Ni離子，即可完成再生。