土壤幾丁質(zhì)酶（Soil Chitinase，S-Chitinase）試劑盒說(shuō)明書
分光光度法 50 管/24 樣
正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：
幾丁質(zhì)主要存在于蝦、蟹、昆蟲等甲殼類動(dòng)物的外殼與軟體動(dòng)物的器官(例如烏賊的軟骨)，以及真菌類的細(xì)胞壁中，而幾丁質(zhì)酶(EC 3.2.1.14)可催化幾丁質(zhì)水解，具有抵御真菌侵染的作用，成為抗真菌病害的研究熱點(diǎn)。
測(cè)定原理：
幾丁質(zhì)酶水解幾丁質(zhì)產(chǎn)生N-乙酰氨基葡萄糖，進(jìn)一步與對(duì)二甲氨基苯甲醛產(chǎn)生紅色化合物，在 585nm處有特征吸收峰，吸光值增加速率反映了幾丁質(zhì)酶的活性。
試劑組成和配制：
產(chǎn)品名稱 | BO6058-50T/24S | Storage |
試劑一：液體 | 10ml | 4℃ |
試劑二：液體 | 4ml | 4℃ |
試劑三：液體 | 50ml | 4℃避光 |
說(shuō)明書 | 一份 |
自備儀器和用品：
天平、水浴鍋、離心機(jī)、震蕩儀、可見(jiàn)分光光度計(jì)、1 ml 玻璃比色皿，甲苯、蒸餾水。
樣品處理：
新鮮土樣風(fēng)干，過(guò) 30-50 目篩。
測(cè)定操作表：
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| 對(duì)照管 | 測(cè)定管 |
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| 土樣（g） | 0.2 | 0.2 |
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| 甲苯（μl） | 30 | 30 |
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| 混勻，25℃靜置 15min |
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| 蒸餾水（μl） | 200 |
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| 試劑一（μl） |
| 200 |
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| 混勻，37℃培養(yǎng) 24h |
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| 蒸餾水（μl） | 400 | 400 |
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4000rpm，4℃，離心 10min，取上清 300μl 于新的EP 管中 |
試劑二（μl） | 30 | 30 |
混勻，沸水浴 5min |
試劑三（μl） | 900 | 900 |
混勻，37℃顯色 20min，取 1ml 于 1ml 玻璃比色皿中，蒸餾水調(diào)零，測(cè)定 585nm 處吸光 值，記為A 對(duì)照管和A 測(cè)定管，ΔA=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管。 |
計(jì)算公式：
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=5.2714x-0.0007，R2=0.9989；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/ml），y 為吸光值ΔA。
酶活性定義：37℃條件下，每克土壤每天分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生 1μg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個(gè)酶活性單位。
土壤幾丁質(zhì)酶活性（μg/d/g 土樣）=（ΔA +0.0007）÷5.2714×V 反總÷W÷T×1000= 598×（ΔA +0.0007） V 反總：反應(yīng)體系總體積，0.63ml；W：樣本質(zhì)量，0.2g；T：反應(yīng)時(shí)間，1d；1000：1mg/ml=1000μg/ml
注意事項(xiàng)：
試劑一充分混勻后再使用。
