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中級(jí)會(huì)員 | 第2年

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土壤幾丁質(zhì)酶(Soil Chitinase,S-Chitinase)試劑盒說(shuō)明書

時(shí)間:2025/3/12閱讀:155
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土壤幾丁質(zhì)酶(Soil Chitinase,S-Chitinase試劑盒說(shuō)明書

分光光度法 50 /24 

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義:

幾丁質(zhì)主要存在于蝦、蟹、昆蟲等甲殼類動(dòng)物的外殼與軟體動(dòng)物的器官(例如烏賊的軟骨),以及真菌類的細(xì)胞壁中,而幾丁質(zhì)酶(EC 3.2.1.14)可催化幾丁質(zhì)水解,具有抵御真菌侵染的作用,成為抗真菌病害的研究熱點(diǎn)。

測(cè)定原理:

幾丁質(zhì)酶水解幾丁質(zhì)產(chǎn)生N-乙酰氨基葡萄糖,進(jìn)一步與對(duì)二甲氨基苯甲醛產(chǎn)生紅色化合物,在 585nm處有特征吸收峰,吸光值增加速率反映了幾丁質(zhì)酶的活性。

試劑組成和配制:

 

產(chǎn)品名稱

BO6058-50T/24S

Storage

試劑一:液體

10ml

4℃

試劑二:液體

4ml

4℃

試劑三:液體

50ml

4℃避光

說(shuō)明書

一份

自備儀器和用品:

天平、水浴鍋、離心機(jī)、震蕩儀、可見(jiàn)分光光度計(jì)、1 ml 玻璃比色皿,甲苯、蒸餾水。

樣品理:

新鮮土樣風(fēng)干,過(guò) 30-50 目篩。

測(cè)定操作表:

 



對(duì)照管

測(cè)定管



土樣g

0.2

0.2



甲苯μl

30

30



混勻,25℃靜置 15min



蒸餾水μl

200




試劑一μl


200



混勻,37℃培養(yǎng) 24h



蒸餾水μl

400

400


4000rpm,4℃,離心 10min,取上清 300μl 于新的EP 管中

試劑二μl

30

30

混勻,沸水浴 5min

試劑三μl

900

900

混勻,37℃顯色 20min,取 1ml  1ml 玻璃比色皿中,蒸餾水調(diào)零,測(cè)定 585nm 處吸光

值,記為A 對(duì)照管和A 測(cè)定管,ΔA=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管。

 

計(jì)算公式:

標(biāo)準(zhǔn)曲線:y=5.2714x-0.0007,R2=0.9989;x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/ml),y 為吸光值ΔA。

酶活性定義:37℃條件下,每克土壤每天分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生 1μg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個(gè)酶活性單位。

土壤幾丁質(zhì)酶活性(μg/d/g 土樣)=ΔA +0.0007÷5.2714×V 反總÷W÷T×1000= 598×ΔA +0.0007 V 反總:反應(yīng)體系總體積,0.63mlW:樣本質(zhì)量,0.2gT:反應(yīng)時(shí)間,1d;10001mg/ml=1000μg/ml

注意事項(xiàng):

試劑一充分混勻后再使用。


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