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中級(jí)會(huì)員 | 第2年

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生化試劑
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土壤β-木糖苷酶測(cè)定試劑盒說明書

時(shí)間:2025/1/13閱讀:378
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土壤β-木糖苷酶(Solid-β- xylosidase, S-β-XYS測(cè)定試劑盒說明書

微量法 100T/48S

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義:

β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物、細(xì)菌和真菌等生物體,是催化木聚糖類半纖維素降解的關(guān)鍵酶,產(chǎn)物木糖可作為碳源應(yīng)用于微生物發(fā)酵。另外,β-木糖苷酶還可以作為生物漂白劑應(yīng)用于造紙工業(yè),比傳統(tǒng)的漂白法環(huán)保,具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。

測(cè)定原理:

S-β-XYS 催化對(duì)硝基苯酚-β-D-木糖苷產(chǎn)生對(duì)硝基苯酚,對(duì)硝基苯酚在 405nm 處有特征吸收峰,測(cè)定405nm 光吸收增加速率,可計(jì)算S-β-XYS 活性。

組成:

 

產(chǎn)品名稱

BO6095-100T/48S

Storage

提取液:液體

100ml

4℃

試劑一:液體

1ml

4℃避光

試劑二:液體

10ml

4℃

試劑三:液體

10ml

4℃

說明書

一份

自備儀器和用品:

天平、低溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板和蒸餾水。

粗酶液提取

0.1g 鮮土或風(fēng)干土樣,加入 1ml 提取液進(jìn)行冰浴勻漿,室溫振蕩提取 30min,然后 10000g,4℃,離心 10min,取上清待測(cè)。

測(cè)定操作表:

1、分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 405nm。

2、操作表

 


對(duì)照管

測(cè)定管

樣本μl

40

40



試劑一μl


10


試劑二μl

80

70

混勻,45℃水浴 20min

試劑三μl

80

80

混勻,靜置 5min,405nm 處測(cè)定吸光值A,計(jì)算ΔA=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管。每個(gè)測(cè)定管

設(shè)一個(gè)對(duì)照管。

 

β-木糖苷酶活性計(jì)算公式:

a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線:y=13.226x+0.0011,R2=0.9998;x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(μmol/ml),y 為吸光值ΔA。酶活定義:每克土樣每天催化產(chǎn)生 1μmol 對(duì)硝基苯酚的酶量為一個(gè)酶活單位。

β-木糖苷酶活性(μmol/d /g 土樣)=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V 反總÷(V ÷V 樣總×W)÷T

=16.33×(ΔA-0.0011)÷W

V 樣總:加入提取液體積,1ml V 反總:反應(yīng)總體積,0.12ml;V 樣:反應(yīng)中樣品體積,0.04ml; W樣品質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時(shí)間,20min=1/72d;

b.  96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線:y=6.613x+0.0011,R2=0.9998;x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(μmol/ml),y 為吸光值ΔA酶活定義:每克土樣每天催化產(chǎn)生 1μmol 對(duì)硝基苯酚的酶量為一個(gè)酶活單位。

β-木糖苷酶活性(μmol/d /g 土樣)=(ΔA-0.0011) ÷6.613×V 反總÷(V ÷V 樣總×W)÷T

=32.66×(ΔA-0.0011)÷W

V 樣總:加入提取液體積,1ml; V 反總:反應(yīng)總體積,0.12ml;V 樣:反應(yīng)中樣品體積,0.04ml; W樣品質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時(shí)間,20min=1/72d;

 

ΔA 控制在 0.01-1 范圍內(nèi),若ΔA 大于 1,可適當(dāng)減小樣本量。標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍為:0.01μmol/ml-0.5μmol/ml


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