目錄:上海牧榮生物科技有限公司>>實驗試劑>>其他試劑>> M3155.0200用于 qPCR 的 ProbeMasterMix FAST High ROX
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 貨號 | M3155.0200 |
|---|---|---|---|
| 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥 |
（ProbeMasterMix FAST High ROX für die qPCR）
包括 500 nM ROX，用于基于探針的 qPCR
高熱穩(wěn)定性、熒光和靈敏度
變性時間短，最長 2 分鐘
優(yōu)化 2 步法 PCR 方案
熱啟動技術(shù)可防止引物二聚體形成，無需在冰上移液，也無需立即進(jìn)一步處理
含 500 nM ROX 的 ProbeMasterMix FAST，用于所有常見模塊系統(tǒng)中的實時熒光定量 PCR。該預(yù)混液設(shè)計用于快速 PCR，變性時間短，采用兩步法 PCR 方案。
Genaxxon ProbeMasterMix 中使用的熱啟動 Taq 聚合酶的優(yōu)勢：
用于室溫構(gòu)建的熱啟動技術(shù)
初始變性時間短，為 2 分鐘或更短
針對 2 步法 PCR 方案進(jìn)行了優(yōu)化
無需在冰上移液
無需立即進(jìn)一步處理 （PCR）。移液式 PCR 方法可以在 RT 中放置長達(dá) 3 天。
擴(kuò)增富含 GC 的模板
高產(chǎn)
無引物二聚體形成
Genaxxon 熱啟動 Taq DNA 聚合酶具有便利性和實用性，可實現(xiàn)一致的效率和特異性：
1。它在低溫下抑制聚合酶，從而可靠地防止非特異性 PCR 反應(yīng)。因此，PCR 設(shè)置不必在冰上進(jìn)行。
2. 這意味著 PCR 方法可以在 RT（20°C 至 25°C）下混合并儲存長達(dá) 3 天，而不會影響最終結(jié)果（例如，在午休期間或等待更多樣品時）。
含 500 nM ROX 的 Probe qPCR Mastermix FAST 包含進(jìn)行定量 PCR 所需的所有組分，且數(shù)量經(jīng)過優(yōu)化。
熱啟動 Taq DNA 聚合酶
dATP、dCTP、dGTP、dTTP
優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液
500 nM ROX 作為標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)部染料
穩(wěn)定劑和增強(qiáng)劑，可實現(xiàn)低拷貝數(shù)靶標(biāo)的擴(kuò)增
1 mL 的小等分試樣簡化了處理和儲存（每個等分試樣的凍融循環(huán)次數(shù)更少）。
特別適用于：Applied Biosystems® 5700、7000、7300、7700、7900、7900 HT、Eppendorf Realplex4、StepOne™ 和 StepOnePlus™。
規(guī)格：
該 ProbeMastermix 是一種即用型 2 次預(yù)混液，含有 500 nM ROX™
初始變性時間
短，針對 2 步法 qPCR
優(yōu)化，等分試樣大小：1 mL。
PCR 引物延伸 多重 PCR 低拷貝靶標(biāo) PCR 實時熒光定量 PCR
One unit is defined as the amount of enzyme which will convert 10 nmoles of dNTPs to an acid-insoluble form in 30 min at 72°C under the assay conditions (25 mM TAPS (tris-(hydroxymethyl)-methyl-amino-propanesulfonic acid, sodium salt) pH 9.3 (25°C); 50 mM KCl; 2 mM MgCl2; 1 mM b-mercaptoethanol; and activated calf thymus DNA as substrate.
eclass-Nr: 32-16-05-02
技巧
快速 PCR：
在進(jìn)行快速實時熒光定量 PCR 時，考慮引物設(shè)計和靶標(biāo)大小非常重要。為了在快速循環(huán)條件下進(jìn)行高效擴(kuò)增，建議靶標(biāo)大小在 70 bp 至 200 bp 之間。目標(biāo)長度越短，總運(yùn)行時間越快。對于其他靶標(biāo)和其他引物組，必須通過實驗確定退火步驟。
請使用以下方案作為靈感，因為您需要根據(jù)您的目標(biāo)大小和應(yīng)用的儀器優(yōu)化儀器設(shè)置。
在 LightCycler® 96 上使用 Genaxxon 預(yù)混液（不含 ROX）快速獲得實時 PCR 結(jié)果
使用 LighCycler96 （Roche） 使用快速循環(huán)實時 2 步方案對不含 ROX 的 GreenMasterMix （2X） 或不含 ROX 的 ProbeMasterMix （2X） 進(jìn)行了測試;分別為快速 PAH12 Green LC 和快速 Pthr 探針 LC。
qPCR 設(shè)置：使用 GreenMasterMix （2X）（不含 ROX）或 ProbeMasterMix （2X）（不含 ROX），靶向 PAH12 （203 bp） 或 Pthr （75 bp） 的引物和 4 種濃度的 gDNA（40 ng、20 ng、10 ng 和 5 ng）。所有 DNA 濃度均以四次重復(fù)測試。見圖 1 和圖 2。PCR 反應(yīng)混合物在 LightCycler® 96 上運(yùn)行（對 ROX 無要求）。所應(yīng)用快速方案的儀器設(shè)置、運(yùn)行時間和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn);將 Fast PAH12 Green LC 和 Fast Pthr 探針 LC 與標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行比較;標(biāo)準(zhǔn) Pthr LC。見表 1.結(jié)果
：標(biāo)準(zhǔn) Fast Pthr 探針 LC 方案的運(yùn)行時間為 80.8 分鐘。快速 PAH12 綠色液相色譜和快速 Pthr 探針液相色譜方案的運(yùn)行時間分別為 47.5 和 40.8 分鐘。所有協(xié)議時間均包括 samping 時間和 15 分鐘熱啟動。如表 1 所示，F(xiàn)ast PAH12 Green LC 和 Fast Pthr Probe LC 方案的確定標(biāo)準(zhǔn)令人滿意。此外，使用不含 ROX 的 Green 2x 預(yù)混液和快速 PAH12 Green 液相色譜方案進(jìn)行的熔解曲線分析證實了高特異性。
在 -20°C 下儲存。 僅供實驗室使用！
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