FITC-聚蔗糖（FITC-Ficoll®） 熒光素異硫氰酸酯-聚蔗糖
化學(xué)名：
聚蔗糖(3´,6´二羥基-3-氧代螺(異苯并呋喃-1(3H),9´-[9H]占噸]-5(或6)-基)氨基硫代甲酸酯]
熒光素異硫氰酸酯-聚蔗糖
結(jié)構(gòu)：
特性
采用類(lèi)似于de Belder和Granath1所述的方法，用熒光素對(duì)聚蔗糖組分進(jìn)行標(biāo)記。通過(guò)穩(wěn)定的硫代氨基甲?；I連接基團(tuán)與熒光素部分進(jìn)行連接，標(biāo)記步驟不會(huì)導(dǎo)致聚蔗糖發(fā)生任何降解。 FITC-polysucroses的DS在0.001-0.008之間，在該低水平范圍內(nèi)，反應(yīng)對(duì)聚蔗糖本身所帶來(lái)的變化被盡可能地減少了。
FITC-聚蔗糖以黃色粉末形式供應(yīng)，其在水或鹽溶液中可以自由溶解，得到黃色溶液。該產(chǎn)品也溶于DMSO、甲酰胺等某些極性有機(jī)溶劑，但不溶于低脂肪醇、丙酮、Chloroform,CHCl3、二甲基甲酰胺。
聚蔗糖分子在溶液中顯示為球形分子，和結(jié)構(gòu)預(yù)期結(jié)果一樣。在表2（下表）中，我們比較了葡聚糖和聚蔗糖組分的Stokes半徑，該數(shù)據(jù)反映了分子靈活性之間的差異。該分子可視作介于堅(jiān)硬的固體圓球和柔性線(xiàn)團(tuán)型鏈端之間的中間體。因此，在比較具有相似分子量的聚蔗糖和葡聚糖組分時(shí)，聚蔗糖的分子尺寸會(huì)小一些。與具有相同濃度的蔗糖溶液相比，聚蔗糖溶液具有非常低的滲透壓。例如，10％的聚蔗糖70溶液的滲透壓為3mOs / kg，而10％蔗糖的滲透壓為150。
目前還沒(méi)有任何關(guān)于FITC-聚蔗糖詳細(xì)毒性研究的報(bào)道。然而，在對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物靜脈內(nèi)施用12g / kg的聚蔗糖組分（100000-500000）后，未表現(xiàn)出任何毒性癥狀。聚蔗糖與細(xì)胞、病毒、微生物等之間具有良好的生物相容性，在細(xì)胞分離技術(shù)中已經(jīng)應(yīng)用了數(shù)十年。
Mw | 聚蔗糖Å | 葡聚糖Å |
|---|
2 x 106 | - | 270 |
1 x 106 | 140 | 199 |
500 000 | 106 | 147 |
200 000 | 74 | 95 |
100 000 | 55 | 69 |
70 000 | 49.5 | 58 |
40 000 | 40 | 44.5 |
10 000 | - | 23.6 |
表2. 聚蔗糖和葡聚糖的分子尺寸比較
光譜數(shù)據(jù)：
圖6. 在0.025M硼酸鹽pH9.0（9.9mg 鹽溶于50ml緩沖液中）中，F(xiàn)ITC-聚蔗糖70的熒光掃描光譜。激發(fā)波長(zhǎng)：496nm；發(fā)射波長(zhǎng)：525 nm。在生物介質(zhì)中進(jìn)行測(cè)量可能會(huì)顯著影響熒光強(qiáng)度，其有可能會(huì)增強(qiáng)，也有可能會(huì)減弱。
儲(chǔ)存和穩(wěn)定性：
在室溫、氣密容器中，F(xiàn)ITC-聚蔗糖粉至少可以穩(wěn)定儲(chǔ)存6年。關(guān)于FITC-聚葡萄糖在溶液中的穩(wěn)定性尚未有任何詳細(xì)研究報(bào)道。然而，熒光素部分和聚蔗糖之間的硫代氨基甲?；B接基團(tuán)的穩(wěn)定性類(lèi)似于葡聚糖上連接基團(tuán)（參見(jiàn)FITC-葡聚糖）的穩(wěn)定性。 FITC-葡聚糖在高35℃的溫度、pH 4下可以保持穩(wěn)定長(zhǎng)達(dá)1個(gè)月，但由于蔗糖中糖苷鍵具有不穩(wěn)定性，所以不推薦將該方案用于聚蔗糖基產(chǎn)品。聚蔗糖本身可以在中性和弱堿性pH下高壓滅菌。
FITC-聚蔗糖的應(yīng)用：
關(guān)于兩種多糖（聚蔗糖（Ficoll®）和葡聚糖）在評(píng)估腎小球選擇性中與腎小球蛋白對(duì)比的可用數(shù)據(jù)已有綜述發(fā)表30。多分散多糖是測(cè)量腎小球選擇滲透性的優(yōu)良探針，其具有可重現(xiàn)性、可靠性和性。作者闡述了可能會(huì)對(duì)結(jié)果產(chǎn)生影響的各種特性，如分子大小、形狀、電荷和靈活性，并評(píng)估它們?cè)诟鞣N孔隙模型中的結(jié)果。靜脈輸注Ficoll腎小球滲透性的研究表明，其滲透性下限值在50Å左右，而葡聚糖預(yù)計(jì)值在60-70 Å，這一點(diǎn)可以由葡聚糖靈活性更大來(lái)解釋。人們還通過(guò)研究FITC-聚蔗糖在缺乏內(nèi)皮細(xì)胞膜的小鼠中的清除率來(lái)闡明大分子運(yùn)輸途徑31。還使用FITC-聚蔗糖70和400（即FITC-菊糖）32來(lái)在不同的腎小球?yàn)V過(guò)率下研究腎小球?yàn)V過(guò)作用。
對(duì)葡聚糖和Ficoll腎小球?yàn)V過(guò)作用的研究顯示，相比于葡聚糖，腎小球膜對(duì)Ficoll表現(xiàn)出更多的限制性屏障作用33。有趣的是，F(xiàn)icoll篩分系數(shù)的值接近于不帶電球狀蛋白質(zhì)的報(bào)道值。用FITC-聚蔗糖70/400監(jiān)測(cè)手術(shù)和肌肉創(chuàng)傷后大鼠的腎小球篩分系數(shù)34。用FITC-聚蔗糖400（960μg）、FITC-聚蔗糖70（40μg）和FITC-菊糖（500μg）混合物作為初次推注給藥給大鼠。使用FITC-聚蔗糖70/400在小窩蛋白-1敲除小鼠中研究腎小球滲透性35。
通過(guò)對(duì)大鼠輸注FITC-聚蔗糖70和白蛋白來(lái)觀(guān)察溫度和氯化銨對(duì)清除率的影響。聚蔗糖的表現(xiàn)與葡聚糖不同，在20-70 Å范圍內(nèi)較低36,37。使用FITC-聚蔗糖70來(lái)評(píng)價(jià)糖尿病9周后天然白蛋白清除率的增加是由于電荷選擇性降低還是大孔徑比例的變化而導(dǎo)致的。
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