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《中國(guó)藥典》2025年版一部大青葉公示稿修訂梳理及研究思路解析
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大青葉（Isatidis folium）是我國(guó)傳統(tǒng)中藥，為十字花科植物菘藍(lán)的干燥葉，具有清熱解毒、涼血消斑的功效，廣泛應(yīng)用于病毒性流行感冒、流行性腮腺炎等感染性疾病。
標(biāo)準(zhǔn)修訂概況
2024年6月，國(guó)家藥典委發(fā)布修訂公示稿，主要修訂點(diǎn)如下：
1、 藥材修訂了薄層鑒別項(xiàng)目，在靛玉紅、靛藍(lán)鑒別基礎(chǔ)上，增加對(duì)照藥材鑒別項(xiàng)目
2、 增加了雜質(zhì)檢查項(xiàng)目
3、 藥材修訂了含量測(cè)定項(xiàng)目，在靛玉紅項(xiàng)目基礎(chǔ)上，增加靛藍(lán)含量測(cè)定項(xiàng)目，建立兩個(gè)化合物同時(shí)測(cè)定方法，優(yōu)化供試品溶液制備流程
4、 同時(shí)修訂飲片標(biāo)準(zhǔn)，包含雜質(zhì)和含量測(cè)定
為全面了解標(biāo)準(zhǔn)修訂情況，島津技術(shù)團(tuán)隊(duì)與起草單位河北省藥品醫(yī)療器械檢驗(yàn)研究院做了詳細(xì)了解，供中藥行業(yè)相關(guān)單位參考。
標(biāo)準(zhǔn)修訂背景
• 現(xiàn)行版藥典大青葉標(biāo)準(zhǔn)及中成藥標(biāo)準(zhǔn)概況
靛藍(lán)、靛玉紅是目前大青葉及其制劑關(guān)注度較高的質(zhì)控指標(biāo)，目前藥典藥材含量測(cè)定僅收載靛玉紅項(xiàng)目測(cè)定方法。藥典共收載27 個(gè)含大青葉的中成藥，19個(gè)靛藍(lán)或靛玉紅的薄層鑒別項(xiàng)，均未設(shè)置大青葉含量測(cè)定項(xiàng)。
• 現(xiàn)行版藥典大青葉標(biāo)準(zhǔn)含量測(cè)定方法及標(biāo)準(zhǔn)修訂難點(diǎn)
靛玉紅采用三氯甲烷索氏提取、高效液相色譜法測(cè)定。但靛藍(lán)在三氯甲烷中解度差，且對(duì)光和熱存在一定程度的不穩(wěn)定性，若仍采用原方法，將造成提取不完全或分解、對(duì)照品難以配制等問(wèn)題，影響含量測(cè)定準(zhǔn)確性。
• 標(biāo)準(zhǔn)立項(xiàng)目的
優(yōu)化《中國(guó)藥典》大青葉質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)含量測(cè)定的指標(biāo)及方法，解決大青葉原標(biāo)準(zhǔn)含量測(cè)定指標(biāo)成分單一、方法繁瑣等問(wèn)題，提高大青葉供試品溶液中靛藍(lán)、靛玉紅的提取率及穩(wěn)定性，優(yōu)化大青葉藥材及飲片的質(zhì)量控制方法，同時(shí)為大青葉中成藥含量測(cè)定方法的建立提供技術(shù)支撐。
標(biāo)準(zhǔn)修訂主要工作簡(jiǎn)介
• 起草使用儀器和色譜柱
• 方法優(yōu)化-方法初選
提取溶劑的選擇：根據(jù)靛藍(lán)、靛玉紅溶解性及實(shí)際實(shí)驗(yàn)效果，在三氯甲烷、甲醇、DMF等多種溶劑中進(jìn)行考察，最終顯示DMF對(duì)二者均有良好的溶解性，但供試品溶液在測(cè)定過(guò)程中呈現(xiàn)較差的穩(wěn)定性。針對(duì)靛藍(lán)、靛玉紅在中性、堿性溶液中不穩(wěn)定的性質(zhì)，最終確定使用含磷酸的DMF 溶液作為提取溶劑，結(jié)果顯示溶解度、穩(wěn)定性均良好。
提取方式的選擇：當(dāng)用加熱回流的?式進(jìn)行提取時(shí)，靛藍(lán)已檢測(cè)不到；當(dāng)用 100℃熱浸時(shí)，靛藍(lán)含量也有不同程度的減少；當(dāng)用超聲提取時(shí)，靛藍(lán)亦有分解。最終確定采用振搖提取，該法提取率高且穩(wěn)定性好。
• 提取條件的單因素考察
磷酸體積分?jǐn)?shù)：各因素對(duì)含量的影響作性原則 ，權(quán)衡高效和普適，為避免高濃度磷酸溶液的低pH 值對(duì)色譜系統(tǒng)的影響，以近平緩的5% 磷酸體積分?jǐn)?shù)為理想試驗(yàn)區(qū)域。
振搖時(shí)間：靛藍(lán)、靛玉紅具有不同程度的光不穩(wěn)定性，為避免影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，并考慮到方法的經(jīng)濟(jì)性，以40 min振搖時(shí)間為理想試驗(yàn)區(qū)域。
料液比：兩個(gè)成分含量隨液料比的變化趨勢(shì)一致，在（20∶1）～（80∶1） mL·g–1范圍內(nèi)，含量呈上升趨勢(shì)，在50∶1 mL·g–1時(shí)趨于平緩。
• Box-Behnken 響應(yīng)面法優(yōu)化提取方法
各因素交互作用對(duì)含量影響的響應(yīng)面圖和等高線圖
通過(guò)軟件優(yōu)化得到實(shí)驗(yàn)條件下的最佳工藝條件及預(yù)測(cè)的結(jié)果，即最佳提取大青葉中靛藍(lán)、靛玉紅的方法為：磷酸體積分?jǐn)?shù)5. 345%，振搖時(shí)間40 min，液料比50∶1 mL·g–1，靛藍(lán)、靛玉紅含量預(yù)測(cè)值分別為746. 659、392. 032 μg·g–1。實(shí)際操作確定方法為磷酸體積分?jǐn)?shù)5%，振搖時(shí)間40 min，液料比50∶1 mL·g–1，進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，得到靛藍(lán)、靛玉紅含量平均值為735. 517、399. 123 μg·g–1，與預(yù)測(cè)值的RSD 為0. 8%、0. 9%，驗(yàn)證建立的回歸模型可靠，優(yōu)化的方法實(shí)際可行。
• 方法學(xué)考察典型圖譜
混合對(duì)照、樣品?譜圖 峰 1 靛藍(lán) 峰 2 靛?紅
• 樣品測(cè)定與限度制定
取藥材 15 批和飲? 20 批，按正??法測(cè)定。收集到的樣品中靛藍(lán)和靛?紅總量在 0.056%~0.435%之間，最低值為 0.056% ，平均值為 0.165%，對(duì)比了不同批次藥材及飲?的性狀，并沒(méi)有發(fā)現(xiàn)明顯的差異或不符合性狀描述的批次。故暫0.050%作為??葉中靛藍(lán)與靛?紅總量的限度值。
• 標(biāo)準(zhǔn)修訂工作相關(guān)成果
與大青葉現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)藥典采用三氯甲烷索氏提取測(cè)定靛玉紅含量的方法相比，優(yōu)化方法科學(xué)選擇了提取溶劑為含磷酸的DMF 溶液，振搖提取的方式，明確了高效、經(jīng)濟(jì)、穩(wěn)定測(cè)定大青葉中靛藍(lán)的新方法，可同時(shí)測(cè)定靛藍(lán)與靛玉紅含量，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確。
河北省藥品醫(yī)療器械檢驗(yàn)研究院在《中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志》2024 年 3 月第 44 卷第 5 期刊登“響應(yīng)面法優(yōu)化《中國(guó)藥典》大青葉含量測(cè)定方法及差異分析”文章。
河北省藥品醫(yī)療器械檢驗(yàn)研究院在2023年10月獲得國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局頒發(fā)發(fā)明專利證書“一種同時(shí)測(cè)定大青葉中靛玉紅與靛藍(lán)含量的方法”，專利號(hào)：ZL 2021 1 10122499.4。
參考文獻(xiàn)：[1]王曉蕾,孫慧珠,劉曉明,等.響應(yīng)面法優(yōu)化《中國(guó)藥典》大青葉含量測(cè)定方法及差異分析[J].中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志,2024,44(05):557-563.DOI:10.13286/j.1001-5213.2024.05.11.
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