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島津企業(yè)管理(中國(guó))有限公司>>技術(shù)文章>>“強(qiáng)強(qiáng)聯(lián)手”——生物惰性液相與多角度光散射檢測(cè)器聯(lián)用,助力雙抗分子量準(zhǔn)確測(cè)定

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“強(qiáng)強(qiáng)聯(lián)手”——生物惰性液相與多角度光散射檢測(cè)器聯(lián)用,助力雙抗分子量準(zhǔn)確測(cè)定

閱讀:574        發(fā)布時(shí)間:2024-2-19

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雙特異性抗體(簡(jiǎn)稱“雙抗”)是一種新型的抗體藥物,它可以同時(shí)發(fā)揮兩種單抗聯(lián)用的協(xié)同作用,臨床價(jià)值很高,但其質(zhì)量控制的要求也非常嚴(yán)格。在雙抗研發(fā)生產(chǎn)過程中,需要對(duì)雙抗分子的大小異質(zhì)性進(jìn)行測(cè)定,以確認(rèn)雙抗的連接情況,保障產(chǎn)品質(zhì)量。

 

然而雙抗分子量的測(cè)定條件中不僅需要使用高濃度的鹽進(jìn)行洗脫,而且紫外檢測(cè)器無法直接得到分子量,這對(duì)常規(guī)液相系統(tǒng)管路的耐腐蝕性及檢測(cè)器提出了挑戰(zhàn)。

 

本文采用島津生物惰性液相色譜儀Nexera XS inert搭配多角度光散射檢測(cè)器(MALS)測(cè)定雙抗分子量,為推斷雙抗連接情況提供分析依據(jù)。

 

分析條件

流動(dòng)相A:50mM磷酸鹽緩沖液+300mM NaCl(pH=6.8)

流動(dòng)相B:乙腈

檢測(cè)器1:二極管陣列檢測(cè)器SPD-M40A

檢測(cè)器2:多角度光散射檢測(cè)器MALS

樣品制備條件及其他分析條件略

 

結(jié)果

MALS需要通過測(cè)定已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)溶液得到儀器響應(yīng)常數(shù),圖1是牛血清蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液(66500Da)色譜圖,計(jì)算得到MALS響應(yīng)強(qiáng)度為2.9626×10-7,SPD-M40A響應(yīng)強(qiáng)度為8.8552×105。

 

 2為雙抗樣品色譜圖,該樣品為單抗Fc端融合型雙抗,雙抗樣品檢出3個(gè)主要色譜峰,計(jì)算得到峰1、峰2、峰3重均分子量Mw分別為197708Da、145121Da、56401Da,三峰重均分子量與數(shù)均分子量的比值(Mw/Mn)均為1.00,峰2與峰3分子量之和201522Da,與峰1分子量偏差為1.92%,因此推測(cè)出:

 

1為雙抗(單抗Fc端融合scFv

2為單抗(未融合scFv

3為單鏈抗體scFv。

雙抗分子量測(cè)定信息見表1。

 

電腦屏幕的截圖

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1 牛血清蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖

 

圖表

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雙抗樣品色譜圖

 

表格

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雙抗樣品分子量分布

 

 

結(jié)論

本文通過體積排阻色譜法(SEC)聯(lián)合多角度光散射檢測(cè)器(MALS)對(duì)單抗Fc端融合型對(duì)稱分子樣品大小異質(zhì)性進(jìn)行分析,SEC根據(jù)分子量大小分離雙抗樣品,MALS檢測(cè)器測(cè)定雙抗樣品分子量,從而推斷雙抗樣品連接情況。此方法簡(jiǎn)單高效、準(zhǔn)確度高,可用于測(cè)定雙抗樣品分子量。

 

Nexera XS inert生物惰性系統(tǒng)將 UHPLC 系統(tǒng)的高壓耐受性與完全惰性的樣品流路完美結(jié)合,確保沒有金屬表面的吸附作用,且具有高耐腐蝕性,從而為生物分子的分離提供了理想的解決方案。

 

圖形用戶界面, 應(yīng)用程序

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?  更大限度降低因金屬吸附而造成的損失

?  輕松應(yīng)對(duì)高鹽濃度和極端pH流動(dòng)相的挑戰(zhàn)

?  獲得卓越的靈敏度、重現(xiàn)性和分離度

 

圖片包含 圖示

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