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《中國藥典》0512高效液相色譜法修訂公示稿梳理 溶液制備溶劑效應應對方案
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導讀
上一篇《《中國藥典》0512高效液相色譜法修訂公示稿梳理 梯度延遲體積應對方案》介紹使用島津液相色譜儀截止環(huán)功能和調(diào)整梯度起點功能可以作為一種方式應對方法開發(fā)時的系統(tǒng)與實際使用系統(tǒng)之間滯留體積的差異。本篇介紹在溶液制備中出現(xiàn)溶劑效應問題如何解決！
l 溶劑效應概念及對分析的影響
在公示稿“溶液制備”章節(jié)中，提到為減少溶劑峰和色譜峰的畸變，制備供試品溶液和參比物質(zhì)溶液可用流動相（或梯度起始比例流動相組成）作為溶劑，這是首次在0512通則修訂公示中收載溶劑效應解決方式。
溶劑效應：樣品注入色譜系統(tǒng)后，兩端靠近流動相的目標物逐漸擴散進入流動相，中心區(qū)域目標物仍溶在原溶劑中，目標物進入色譜柱后，流動相氛圍中的目標物以正常速度被洗脫，溶劑氛圍中的目標物因強溶劑洗脫，移動速度快，樣品在空間上開始分裂，即樣品溶劑的洗脫強度強于流動相強度而導致的色譜峰展寬，分叉(嚴重時分裂)的現(xiàn)象，另外在多個項目中我們發(fā)現(xiàn)可能會出現(xiàn)峰形前延、肩峰等現(xiàn)象，而峰形較差會顯著影響定性和定量指標。
在梯度洗脫中，溶劑效應對出峰較早的色譜峰影響更為明顯。溶劑效應會影響峰形，從而影響理論塔板數(shù)、分離度等，應盡可能改善該現(xiàn)象！
l 溶劑效應解決辦法
1. 使用初始流動相溶解待測樣品，公示稿首次收載該方法。
2. 減少進樣體積，需要注意靈敏度是否滿足標準要求。
3. 增加柱前管路的體積，需要改配置。
4. Co-injection（共同注入） 進樣功能，軟件中可直接選擇該模式，操作簡便。
l 推薦儀器方案
l 應用案例
1、《中國藥典》2020年版第一增補本 石淋通片【指紋圖譜】
《中國藥典》2020年版第一增補本中，石淋通片增加了【指紋圖譜】和【含量測定】的項目。在進行對照品夏佛塔苷進樣過程中，發(fā)現(xiàn)了較嚴重的溶劑效應，可見以上對比圖。使用標準進樣方式，由于溶劑效應會導致峰分叉，采用 Co-injection 進樣功能可有效解決此問題。
2、《中國藥典》2020年版 2341第五法 藥材及飲片（植物類）中禁用農(nóng)藥多殘留測定法
禁用農(nóng)藥相關檢測標準實施已經(jīng)有三年，島津技術團隊在走訪幾十家企業(yè)和藥檢了解到，在出峰較早的化合物存在明顯的溶劑效應現(xiàn)象，導致峰形出現(xiàn)分叉（嚴重時出現(xiàn)分裂）、肩峰、峰展寬及峰前延等，以上展示是國內(nèi)某藥品檢驗機構(gòu)使用島津Co-injection功能有效解決了殺蟲脒和久效磷峰形問題。
3、《中國藥典》2020年版 2351第六法 多種真菌毒素測定法
島津技術團隊在復現(xiàn)標準中發(fā)現(xiàn)嘔吐毒素存在肩峰現(xiàn)象，使用Co-injection功能有效改善了峰形，并提升了響應。
4、杜仲配方顆粒國家藥品標準【含量測定】
杜仲配方顆粒標準起初要求理論塔板數(shù)按松脂醇二葡萄糖苷峰計算理論塔板數(shù)應不低于10000，在后續(xù)的修訂稿中修訂為不低于8000。島津技術團隊在走訪配方顆粒企業(yè)時，客戶提到即使修訂為8000的要求，對色譜柱選型要求還是很高，并且耐用性需要完善，島津技術團隊與客戶共同尋找背后可能存在的原因和解決辦法，最終發(fā)現(xiàn)兩種方案可以解決（Co-injection進樣功能或者優(yōu)化有機相比例為22%），兩種方案任選其一即可。
注：本文中所用數(shù)據(jù)均為島津?qū)嶒炇姨囟l件下的測試數(shù)據(jù)，結(jié)果可能隨實際情況變動
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