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島津成像質(zhì)譜顯微鏡應(yīng)用專題丨毒性評(píng)價(jià)研究

閱讀:593        發(fā)布時(shí)間:2021-5-28

 


使用iMScope TRIO 進(jìn)行的毒性評(píng)價(jià)研究

-胺碘酮給藥后大鼠肺臟局部分析-

 

在藥物研發(fā)過(guò)程中,候選化合物的藥代動(dòng)力學(xué)分析不僅能闡明藥效藥理學(xué)機(jī)制,從毒性評(píng)價(jià)的觀點(diǎn)出發(fā)也能帶來(lái)重要的信息。一般情況下,會(huì)采用放射自顯影(Autoradiography: ARG)和熒光染料的方法,但ARG的費(fèi)用十分昂貴,若將熒光劑作為標(biāo)記試劑使用又可能會(huì)對(duì)藥代動(dòng)力學(xué)造成影響。于是,近年來(lái),作為非標(biāo)記檢測(cè)候選化合物局部信息的方法,MS成像的分析技術(shù)備受矚目。本方法不僅能在不進(jìn)行標(biāo)記的情況下進(jìn)行各種物質(zhì)的成像分析,還能在同一切片上同時(shí)進(jìn)行原藥和代謝物的檢測(cè),為新藥研發(fā)帶來(lái)突破。

 

在此,為比較胺碘酮(圖1)給藥后,大鼠肺組織中觀察到的病理現(xiàn)象和胺碘酮的分布情況,使用成像質(zhì)譜顯微鏡iMScope TRIO(圖2)進(jìn)行MS成像分析。

 

——R. Yamaguchi, T.Yamamoto

 

 

 

1 胺碘酮的結(jié)構(gòu)式

  

2 iMScope TRIO

 

胺碘酮給藥后的大鼠肺臟局部分析

 

本實(shí)驗(yàn)中,對(duì)大鼠給予抗心律失常藥物胺碘酮并對(duì)其肺組織進(jìn)行分析。大量攝取胺碘酮后會(huì)引發(fā)磷脂質(zhì)病,能觀察到細(xì)胞的泡沫狀巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)等現(xiàn)象。但至今為止并沒(méi)有關(guān)于胺碘酮是否會(huì)在病變部位蓄積的信息,因此在本實(shí)驗(yàn)中采用MS成像的方法確認(rèn)了病理現(xiàn)象與胺碘酮之間的關(guān)系。使用胺碘酮標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn),選擇基質(zhì)并對(duì)測(cè)量模式進(jìn)行優(yōu)化。樣本制作及組織切片MS成像分析的實(shí)驗(yàn)條件如表1所示。

 

1 實(shí)驗(yàn)條件

  

使用成像質(zhì)譜顯微鏡iMScope TRIO,進(jìn)行空間分辨率為5 μm的高分辨率成像,將所得組織切片上的質(zhì)譜圖與標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)譜圖進(jìn)行比較后,發(fā)現(xiàn)兩者均檢測(cè)得到m/z 646.0的信號(hào)(圖3)。選擇m/z 646.0成像,確認(rèn)在細(xì)胞的泡沫狀巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)的部位有胺碘酮積蓄(圖4)。

 

  

3 組織切片和胺碘酮標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)譜圖

 

  

4 連續(xù)切片的HE 染色圖像和分析使用的光學(xué)圖像和MS成像

 

胺碘酮代謝產(chǎn)物的局部分析

 

有報(bào)告指出,給藥后,胺碘酮會(huì)在大鼠體內(nèi)發(fā)生N-脫乙基代謝。本實(shí)驗(yàn)觀測(cè)到與胺碘酮原型藥物相比小28 Da的m/z 618.0離子(圖5)。m/z 618.0的MS圖像如圖6所示,與胺碘酮的局部分布相同。據(jù)此,可認(rèn)為m/z 618.0的化合物有很大可能是胺碘酮的N-脫乙基化代謝物。

 

  

5 組織切片的質(zhì)譜圖(m/z 600-700放大)

  

6 MS圖像(與代謝物的分子量相當(dāng))

 

MS圖像與HE染色圖像*一致的可能性

 

由于無(wú)法對(duì)HE染色后的切片進(jìn)行MS成像分析,需要對(duì)與HE染色切片連續(xù)的未染色切片進(jìn)行MS成像分析。但是,即使是連續(xù)切片,組織形態(tài)相似也不等于*一致,有必要依靠特征性的標(biāo)記進(jìn)行定位。如今,為解決該問(wèn)題,按照如圖7所示的流程,用有機(jī)溶劑從經(jīng)MS成像分析的切片中除去基質(zhì),然后進(jìn)行HE染色,由此研究確保了相同切片的HE染色圖像與MS圖像的位置信息*一致。

 

  

7 MS成像分析后組織切片HE染色流程

 

致謝

在獲取本應(yīng)用文集相關(guān)數(shù)據(jù)以及原稿編寫(xiě)過(guò)程中,田邊三菱制藥株式會(huì)社藥代動(dòng)力學(xué)研究所的鍛治秀文老師、以及橋本博幸老師給予了我們莫大幫助,在此我們致以最誠(chéng)摯的謝意。

 

文獻(xiàn)題目

《使用iMScope TRIO 進(jìn)行的毒性評(píng)價(jià)研究-胺碘酮給藥后大鼠肺臟局部分析-》

 

使用儀器

島津iMScope TRIO

 

作者

R. Yamaguchi, T.Yamamoto

 

聲明

1、本文不提供文獻(xiàn)原文。

2、所引用文獻(xiàn)僅供讀者研究和學(xué)習(xí)參考,不得用于其他營(yíng)利性活動(dòng)。

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