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生物藥島津說-利用島津Q-TOF質譜進行貝伐單抗生物類似藥抗體表征分析

閱讀:640        發(fā)布時間:2021-2-5

 

Bevacizumab是重組人源化人血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)單克隆抗體,作為美國第一個獲得批準上市的抑制腫瘤血管生成的藥,可用于轉移性結直腸癌以及非鱗狀非小細胞肺癌治療等。在中國,超過10家貝伐珠單抗生物類似藥在研發(fā)上市過程中,面對生物類似藥分析,充滿技術挑戰(zhàn),貝伐單抗生物類似藥表征是質量控制關鍵點之一,分析過程中,抗體肽圖分析方法尤為關鍵,今天我們就聊一聊貝伐單抗生物類似藥肽圖分析技術方法。

 

肽圖分析(peptide mapping)是研究抗體藥物結構組成的重要技術之一,抗體通過酶切處理后,利用色譜結合島津高分辨Q-TOF質譜LCMS-9030分析,不僅可以對蛋白質氨基酸序列進行分析,同時可以對于相應肽段的翻譯化修飾(PTM)進行分析。通過島津反相HPLC方法分離不同性質的肽段,后續(xù)肽段通過高分辨質譜進行一級和二級掃描,通過監(jiān)測的母離子和子離子匹配相應的肽段氨基酸序列以及存在的修飾。肽圖分析是抗體蛋白藥物質量控制的重要手段,島津高分辨質譜可以完成相關所有的分析檢測項目。

 

分析儀器及色譜柱方案

 

01分析儀器

 

LCMS-9030四極桿飛行時間質譜儀使高速度、高靈敏度的四極桿質譜與TOF技術的緊密結合。融合島津先進工程技藝的DNA,打造出速度與出色性能兼?zhèn)涞娜乱淮叻直尜|譜儀,以優(yōu)異表現(xiàn)輕松勝任定性和定量分析挑戰(zhàn)。

 

 

LCMS-9030

 

02液相色譜柱

 

 反相肽段分析用色譜柱

 壽命長,耐壓高,出峰穩(wěn)定

 

Shim-pack GISS-HP,3um,150*3.0 mm

 

應用實例

 

bevacizumab 生物類似藥為例,進行peptide mapping分析,將抗體蛋白通過胰酶酶切后,通過反相色譜質譜分離后進入高分辨Q-TOF質譜進行一級全掃描和二級掃描,高分辨數(shù)據(jù)提取分析匹配相應的肽段序列,完整流程如下圖所示。

 

 

. 利用島津LCMS-9030抗體測序基本流程以及舉例

 

島津分析bevacizumab 生物類似藥序列分析,通過Shim-pack GISS-HP色譜柱(3um,150*3.0 mm),可以高效分離酶切后的輕重鏈肽段,后用LC-MS 9030 進行一級和二級掃描,參數(shù)色譜質譜參數(shù)如下表所示。

 

 

. 利用島津LCMS-9030抗體測序詳細參數(shù)

 

通過軟件分析高分辨數(shù)據(jù),進而匹配生物類似藥的重鏈和輕鏈序列,完成整個抗體的肽圖分析。因篇幅有限,以重鏈肽段序列部分數(shù)據(jù)進行展示,匹配覆蓋率100%,可以說明島津LCMS-9030 Q-TOF質譜在抗體肽段分析方面具有強大的實力。部分序列分析結果見下圖所示。

 

 

.bevacizumab 生物類似藥重鏈測序結果展示(部分展示)

 

結合前述案例,島津建立高分辨質譜LCMS-9030針對抗體藥物進行肽圖分析完整策略,此外對于分子量分析、翻譯化修飾、二硫鍵分析、糖基化分析,LCMS-9030可以完成所有相關抗體藥物關鍵質量屬性檢測,為用戶節(jié)能增效,創(chuàng)造大價值。

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