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溶出性抗菌織物抗(抑)效果浸漬試驗

閱讀:2110        發(fā)布時間:2018/3/30
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1 原  理 
將試樣和對照織物分別放于三角瓶中,用含有肉湯培養(yǎng)基的試驗菌懸液接種于試樣和對照織物上,經(jīng)培養(yǎng)后,分別將培養(yǎng)前后試樣上的細菌洗下,測定細菌的數(shù)量,可計算出試樣上細菌減少的百分率。該方法適用于溶出性抗菌織物抗(抑)效果的檢測。

 

2 實驗器材 

(1)實驗菌株  金黃色葡萄球菌(ATCC 6538) 

(2)試樣  在距試樣布邊 10cm 以上、離布端 1m 以上部位,剪取直徑為 5cm 的圓形試樣若干(需用試樣數(shù)量要根據(jù)纖維類別及織物織法而定,以能吸收1ml 菌液且三角瓶中不留殘液為度)。另同法剪取對照織物若干,取 3 份試樣和 2 份對照織物分別裝于三角瓶中,蓋好瓶口,121℃ 15min滅菌備用 

(3)肉湯培養(yǎng)基 

(4)胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基 

(5)磷酸鹽緩沖液(PBS,0.03mol/L,pH為7.2~7.4)

(6)恒溫水浴箱

(7)37℃培養(yǎng)箱

 

3 菌懸液的制備 
用接種環(huán)將保存的菌種以劃線法接種到營養(yǎng)瓊脂平皿上,在 37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 24h,取平皿上典型的菌落移種到含肉湯培養(yǎng)基的三角瓶中,在 37℃條件下培養(yǎng) 24h,用肉湯對培養(yǎng)液進行系列稀釋,使菌懸液的含菌量為 1×105cfu/mL~5×105cfu/mL。

 

4 試驗步驟 

(1)分別取 1mL 菌懸液加在 3 份準備好的三角瓶內(nèi)的織物上,確保其均勻分布,且三角瓶中不留多余液,封好瓶口,以防蒸發(fā)。 

(2)分別在一個盛有試樣和對照織物的三角瓶中加入 100mL 緩沖液,劇烈搖晃 1min 洗滌細菌,取 1mL 做系列1 0倍稀釋,選適當稀釋度以傾注法接種平皿,作為“0”接觸時間樣品和對照織物上的細菌數(shù)。  

(3)將另一個裝有接種試樣的三角瓶在 37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 20h±2h,然后加入 100mL緩沖液,劇烈搖晃 1min 洗滌細菌,取 1mL 做系列10倍稀釋,選適當稀釋度以傾注法接種平皿,作為試驗組。   

(4)試樣不接種菌懸液,在“0”接觸時間加入 100mL 緩沖液,劇烈搖晃 1min 取樣,接種平皿,作為陰性對照組。 

(5)另取1個裝有對照織物的三角燒瓶,接種 1mL 菌懸液后,在 37℃ 恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)20h±2h,然后加入 100mL 緩沖液,劇烈搖晃 1min 洗滌細菌,取 1mL 做系列10倍稀釋,選適當稀釋度以傾注法接種平皿,作為陽性對照組。 

(6)將陰性和陽性對照樣本與試驗組樣本一并放入 37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h,計數(shù)菌落數(shù)。 

(7)試驗重復(fù)3次。

(8)結(jié)果計算

B或C或(B+C)/2-A 
抑菌率(%)=                     ×100 
B或C或(B+C)/2  

 試驗組試樣上的細菌數(shù); “0”接觸時間試樣上的細菌數(shù);

“0”接觸時間對照織物上的細菌數(shù); 

如果“B”和“C”差別較大時,取較大值;如果“B”和“C”差別不大時,取平均值。

 

5 評價規(guī)定 

“0”接觸時間對照織物的平均菌落數(shù)應(yīng)在 1×103cfu/mL~5×103cfu/mL。 陰性對照應(yīng)無菌生長,陽性對照菌數(shù)比“0”接觸時間的菌數(shù)明顯增加。 各次試驗的抑菌率均≥50%,即判定該樣片具有抗菌作用。

 

6 注意事項 
對織物進行染菌操作時,應(yīng)確保其均勻分布,且三角瓶中不沾染或存留多余菌液。 三角瓶內(nèi)的織物染菌后,應(yīng)將瓶口封好,以防液體蒸發(fā),造成細菌死亡。

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