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振蕩燒瓶試驗

閱讀:1540        發(fā)布時間:2018/3/29
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1 原  理 

在液體中通過快速長時間振蕩, 增加微生物與抗(抑)菌產(chǎn)品內(nèi)抑菌劑的接觸以顯示其抑菌作用。試驗根據(jù)抑菌率大小判斷其是否具有抑菌能力。本試驗適用于對非溶出性抗(抑)菌織物的抗(抑)菌效果鑒定。

 

2 實驗器材 

(1)實驗菌株  金黃色葡萄球菌(ATCC 6538)、大腸桿菌(8099)、白色念珠菌(ATCC 10231) 菌懸液的制備方法見2.1.2。根據(jù)抑菌劑特定用途也可用其他菌懸液  

(2)磷酸鹽緩沖液(PBS,0.03mol/L,pH值7.2)

(3)振蕩搖床 (300r/min)

(4)三角燒瓶 

(5)營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基(TSA)與沙堡瓊脂培養(yǎng)基

 

3 操作程序 

(1)將抗菌物品剪切成 10mm×10mm 樣片,稱取 0.75g 2份分別置入 250mL 的三角燒瓶中。 

(2)在上述三角燒瓶中加入 70mL PBS和 5mL菌懸液,使菌懸液在PBS中的濃度為1×104cfu/mL~5×104cfu/mL。 

(3)將三角燒瓶固定于振蕩搖床上,在作用溫度為 20℃~25℃ 的條件下,以300r/min分別振搖 2min、1h。吸取 1.0mL 用PBS作適當(dāng)稀釋至10-2,作為試驗組振蕩前樣液。

(4)分別吸取振蕩前和振蕩后樣液及適當(dāng)稀釋度的稀釋液各 1.0mL,以瓊脂傾注法接種平皿,每個樣液接種2個平皿,按照2.1.3規(guī)定的方法進行活菌培養(yǎng)計數(shù)。 

(5)試驗同時設(shè)陰性對照樣片和不加樣片組。對照樣片組以不含抗菌劑的材質(zhì)、大小相同的樣片代替抗菌樣片外, 其它操作程序均與實驗組相同。 不加樣片組分別取 5mL菌懸液和 70mL PBS加入 250mL 三角燒瓶中,混勻,分別于振蕩前和振蕩后 1h,各取 1.0mL 菌懸液與PBS的混合液做適當(dāng)稀釋。同上,按2.1.3法進行活菌培養(yǎng)計數(shù)。 

(6)以試驗同批次的稀釋液、培養(yǎng)基分別設(shè)陰性對照。

(7)試驗重復(fù)3次,按下式計算抑菌率 
抑菌率=(樣品振蕩前平均菌落數(shù)-樣品振蕩后平均菌落數(shù))/樣品振蕩前平均菌落數(shù)×100%

 

4 評價規(guī)定 

(1)各次試驗陰性對照均應(yīng)無菌生長。 

(2)不加樣片組活菌計數(shù)在 1×104cfu/mL~5×104cfu/mL之間, 且樣本振蕩前后平均菌落數(shù)差值在 10% 以內(nèi), 試驗有效。 

(3)各次試驗中,試驗樣片抑菌率與對照樣片抑菌率的差值菌>26%, 即判定該產(chǎn)品具有抗菌作用。

5 注意事項 

振蕩前須將振蕩搖床上的三角燒瓶固定牢,以免碰破。 
試驗中,在實驗誤差允許的范圍內(nèi),如果試驗組和對照組出現(xiàn)振蕩后菌落數(shù)高于振蕩前 菌落數(shù)的情況,其抑菌率可按“0”計算。

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