關(guān)鍵詞:RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)技術(shù)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
簡介：世界*品牌RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)技術(shù)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)原裝，質(zhì)量保證,*。
RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)技術(shù)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系。
我們具備豐富的蛋白表達(dá)設(shè)計經(jīng)驗(yàn)及實(shí)驗(yàn)操作技巧，承諾客戶不成功不收費(fèi)。在獲得重組蛋白產(chǎn)品的同時，我們也會提供相應(yīng)的原始數(shù)據(jù)和原始圖片,不需要再額外花費(fèi)精力重復(fù)實(shí)驗(yàn)。另一方面，我們所有的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)真實(shí)可信，我們提供原始的表達(dá)菌株和克隆質(zhì)粒，客戶可以依據(jù)我們的實(shí)驗(yàn)報告重復(fù)我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
產(chǎn)品品牌：RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)技術(shù)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)   http://www.。。ｃｏｍ/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
測序?qū)嶒?yàn)流程：
 cDNA末端快速擴(kuò)增技術(shù)（rapid amplification of cDNA ends，RACE）是一種基于RT-PCR，在僅知目標(biāo)基因部分表達(dá)片段的基礎(chǔ)上，從低豐度的轉(zhuǎn)錄本中快速擴(kuò)增其cDNA的5’和3’末端的有效方法，以其簡單、快速、廉價等優(yōu)勢而受到越來越多的重視。RACE實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵在于高質(zhì)量與完整性好的RNA以及特異性強(qiáng)的引物。我們采用國內(nèi)目前應(yīng)用zui廣的SMARTerTM RACE cDNA Amplification Kit（CLONTECH）進(jìn)行cDNA的5’和3’末端片段克隆。  zui終，從2個有相互重疊序列的5’和3’-RACE產(chǎn)物中獲得全長cDNA；或者通過分析RACE產(chǎn)物的5’和3’端序列，合成相應(yīng)引物擴(kuò)增出全長cDNA。
與篩庫法相比較，有許多方面的優(yōu)點(diǎn)
1）此方法是通過PCR技術(shù)實(shí)現(xiàn)的，無須建立cDNA文庫，可以在很短的時間內(nèi)獲得有利用價值的信息。
2）節(jié)約了實(shí)驗(yàn)所花費(fèi)的經(jīng)費(fèi)和時間。
3）只要引物設(shè)計正確，在初級產(chǎn)物的基礎(chǔ)上可以獲得大量的感興趣基因的全長。
實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有的RACE試劑盒的簡介
??RACE是一種從一個相同的cDNA模板進(jìn)行5‘和3‘末端快速克隆的方法。此方法會產(chǎn)生較少的錯誤條帶。此過程中使用的酶混合物非常適合長鏈PCR。
??使用此方法的要求是必須知道至少23－28個核苷酸序列信息，以此來設(shè)計5’末端和3‘末端RACE反應(yīng)的基因特異性引物（GSPs）。
RACE引物的設(shè)計：
基因特異性引物（GSPs）應(yīng)該是：
??23－28nt
??50－70％GC
??Tm值≥65度，Tm值≥70度可以獲得好的結(jié)果
需要實(shí)驗(yàn)者根據(jù)已有的基因序列設(shè)計5‘和3‘RACE反應(yīng)的基因特異性引物（GSP1和GSP2).由于兩個引物的存在，PCR的產(chǎn)物是特異性的。
有3種驗(yàn)證RACE產(chǎn)物的方法：
（1）比較由GSP和NGSP獲得RACE產(chǎn)物。
（2）Southern blot
（3）克隆并測序
??我們建議測得RACE產(chǎn)物的部分序列。有的時候需要嵌套引物的存在。
比較由GSP和NGSP獲得RACE產(chǎn)物。
??對于5‘末端的RACE產(chǎn)物，比較由AP1和GSP1擴(kuò)增出來的產(chǎn)物和由AP1和NGSP1擴(kuò)增出來的產(chǎn)物。
??對于3‘末端的RACE產(chǎn)物，比較由AP1和GSP2擴(kuò)增出來的產(chǎn)物和由AP1和NGSP2擴(kuò)增出來的產(chǎn)物。這對于鑒定多條帶是否是上一個PCR的特異性產(chǎn)物是非常有用的。
??如果條帶是正確的，在嵌套PCR反應(yīng)中的條帶應(yīng)該是略微小一些?；綪CR和嵌套PCR產(chǎn)物的遷移率的不同取決于ｃＤＮＡ結(jié)構(gòu)中GSP1和嵌套引物的位置。
注意:
當(dāng)循環(huán)結(jié)束時，利用1.2%瓊脂糖凝膠電泳分析每一個管中的產(chǎn)物5μl，使用適當(dāng)?shù)姆肿恿縨arker。
?可以根據(jù)你的基因的特異性來設(shè)計的循環(huán)參數(shù)。如果看不到帶或者只有微弱的帶，在68度多加5個循環(huán)。*的延伸時間取決于擴(kuò)增條帶的長度。如果片斷的長度在2－5kb的時候，經(jīng)常使用4min，0.2-2kb的時候?qū)⒀由鞎r間減到2－3min，對于5－10kb的條帶，延伸時間增加到10min。