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上海拜力生物科技有限公司

RACE服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)

時間:2015-5-15閱讀:482

關(guān)鍵詞:RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)
簡介:世界*品牌RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)原裝,質(zhì)量保證,*。
RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
我們具備豐富的蛋白表達設(shè)計經(jīng)驗及實驗操作技巧,承諾客戶不成功不收費。在獲得重組蛋白產(chǎn)品的同時,我們也會提供相應(yīng)的原始數(shù)據(jù)和原始圖片,不需要再額外花費精力重復(fù)實驗。另一方面,我們所有的實驗數(shù)據(jù)真實可信,我們提供原始的表達菌株和克隆質(zhì)粒,客戶可以依據(jù)我們的實驗報告重復(fù)我們的實驗結(jié)果。
產(chǎn)品品牌:RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)   http://www.。。com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
測序?qū)嶒灹鞒蹋?br> cDNA末端快速擴增技術(shù)(rapid amplification of cDNA ends,RACE)是一種基于RT-PCR,在僅知目標基因部分表達片段的基礎(chǔ)上,從低豐度的轉(zhuǎn)錄本中快速擴增其cDNA的5’和3’末端的有效方法,以其簡單、快速、廉價等優(yōu)勢而受到越來越多的重視。RACE實驗成功的關(guān)鍵在于高質(zhì)量與完整性好的RNA以及特異性強的引物。我們采用國內(nèi)目前應(yīng)用zui廣的SMARTerTM RACE cDNA Amplification Kit(CLONTECH)進行cDNA的5’和3’末端片段克隆。  zui終,從2個有相互重疊序列的5’和3’-RACE產(chǎn)物中獲得全長cDNA;或者通過分析RACE產(chǎn)物的5’和3’端序列,合成相應(yīng)引物擴增出全長cDNA。
與篩庫法相比較,有許多方面的優(yōu)點
1)此方法是通過PCR技術(shù)實現(xiàn)的,無須建立cDNA文庫,可以在很短的時間內(nèi)獲得有利用價值的信息。
2)節(jié)約了實驗所花費的經(jīng)費和時間。
3)只要引物設(shè)計正確,在初級產(chǎn)物的基礎(chǔ)上可以獲得大量的感興趣基因的全長。
實驗室現(xiàn)有的RACE試劑盒的簡介
??RACE是一種從一個相同的cDNA模板進行5‘和3‘末端快速克隆的方法。此方法會產(chǎn)生較少的錯誤條帶。此過程中使用的酶混合物非常適合長鏈PCR。
??使用此方法的要求是必須知道至少23-28個核苷酸序列信息,以此來設(shè)計5’末端和3‘末端RACE反應(yīng)的基因特異性引物(GSPs)。
RACE引物的設(shè)計:
基因特異性引物(GSPs)應(yīng)該是:
??23-28nt
??50-70%GC
??Tm值≥65度,Tm值≥70度可以獲得好的結(jié)果
需要實驗者根據(jù)已有的基因序列設(shè)計5‘和3‘RACE反應(yīng)的基因特異性引物(GSP1和GSP2).由于兩個引物的存在,PCR的產(chǎn)物是特異性的。
有3種驗證RACE產(chǎn)物的方法:
(1)比較由GSP和NGSP獲得RACE產(chǎn)物。
(2)Southern blot
(3)克隆并測序
??我們建議測得RACE產(chǎn)物的部分序列。有的時候需要嵌套引物的存在。
比較由GSP和NGSP獲得RACE產(chǎn)物。
??對于5‘末端的RACE產(chǎn)物,比較由AP1和GSP1擴增出來的產(chǎn)物和由AP1和NGSP1擴增出來的產(chǎn)物。
??對于3‘末端的RACE產(chǎn)物,比較由AP1和GSP2擴增出來的產(chǎn)物和由AP1和NGSP2擴增出來的產(chǎn)物。這對于鑒定多條帶是否是上一個PCR的特異性產(chǎn)物是非常有用的。
??如果條帶是正確的,在嵌套PCR反應(yīng)中的條帶應(yīng)該是略微小一些?;綪CR和嵌套PCR產(chǎn)物的遷移率的不同取決于cDNA結(jié)構(gòu)中GSP1和嵌套引物的位置。

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