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40614ESGMyc-PCR Mycoplasma Detection Kit (2G)
| 參考價: | 面議 |
具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)- 40614ES 產(chǎn)品型號
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問次數(shù)：146更新時間：2025-02-07 13:37:55
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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè) |
|---|
產(chǎn)品介紹
產(chǎn)品簡介
支原體PCR檢測試劑盒（巢式PCR）(2G)是基于巢式PCR法(NestedPCR)對各種生物材料（如細(xì)胞培養(yǎng)物、實驗動物分泌物和動物血清等）支原體感染的檢測。該試劑盒采用定量PCR技術(shù)，針對支原體16S-23S rRNA序列保守區(qū)域設(shè)計兩套引物，進(jìn)行兩輪PCR擴(kuò)增，以第二輪擴(kuò)增產(chǎn)物為準(zhǔn)進(jìn)行支原體污染情況判斷。其可檢出包括口腔支原體(M.orale)、肺炎支原體(M.pneumoniae)、豬鼻支原體(M.hyorhinis)、精氨suan支原體(M.arginini)、雞敗血支原體(M.gallisepticum)、關(guān)節(jié)液支原體(M.synoviae)、發(fā)酵支原體(M.fermentans)、檸檬螺原體(Spiroplasma citri)、唾液支原體(M.salivarium)等在內(nèi)的共34種支原體，靈敏度可達(dá)2.5 copies/uL，對于10 CFU/mL支原體標(biāo)準(zhǔn)菌株也可正常擴(kuò)增有條帶，具備特異性強、靈敏度高、操作方便快速等特點，可直接用于細(xì)胞培養(yǎng)上清液的檢測。
本產(chǎn)品相較于常規(guī)PCR法支原體檢測試劑盒，可避免由于引物與模板之間的非特異配對，導(dǎo)致非特異性產(chǎn)物的產(chǎn)生；還可靈敏的檢測到樣本中微量的支原體DNA，避免假陰性的產(chǎn)生。
產(chǎn)品信息
貨號 | 40614ES10 / 40614ES20 |
規(guī)格 | 10 assays / 20 assays |
組分信息
組分編號 | 組分名稱 | 40614ES10 | 40614ES20 |
40614-A* | GMyc-1st PCR Mix | 460 μL | 460 μL×2管 |
40614-B* | GMyc-2nd PCR Mix | 490 μL | 490 μL×2管 |
40614-C** | Positive Control Template | 20 μL | 40 μL |
*PCR反應(yīng)極其靈敏，為防止假陽性，加樣時，最后加陽性對照。
**40614-C：Positive Control Template，陽性對照。
運輸和儲存條件
干冰運輸，-25~-15℃保存，有效期1年。
*整個試劑盒若較長時間不用，請避光保存。其中40614-C長期不用時，可-85~-65℃冷凍保存。
使用說明
實驗前準(zhǔn)備
1）提前準(zhǔn)備實驗所需試劑耗材：
如：瓊脂糖凝膠、電泳緩沖液、DNA marker等試劑和移液槍、無菌吸頭、離心管等耗材。
2）自備實驗所需設(shè)備和儀器：
如：漩渦振蕩器、PCR儀、微量離心機(jī)、電泳儀等。
實驗方法
1）待測樣本類型：
a. 本試劑盒可以直接檢測細(xì)胞上清、血清和培養(yǎng)基，以及細(xì)胞DNA等。細(xì)胞培養(yǎng)3-6天后，直接取其上清液進(jìn)行PCR反應(yīng)。為排除細(xì)胞培養(yǎng)基抑制PCR反應(yīng)，陽性對照中需加入等量的細(xì)胞上清液。
b. 對于細(xì)胞懸液類樣本，則需要先經(jīng)過樣本前處理，提取總DNA后，才可進(jìn)行檢測。
2）實驗結(jié)果判讀：
本試劑盒需要進(jìn)行兩輪PCR反應(yīng)：第一輪PCR結(jié)束后，取其反應(yīng)產(chǎn)物作為第二輪PCR的模板，根據(jù)兩輪PCR產(chǎn)物電泳條帶之有無及片段大小來分析結(jié)果（第一輪陽性對照PCR條帶大小為389bp、第二輪陽性對照PCR條帶大小為247bp）。其中，應(yīng)以第二輪擴(kuò)增產(chǎn)物結(jié)果為準(zhǔn)，進(jìn)行有無支原體污染的判斷。
3）第一輪PCR：
a. 充分融解GMyc-1st PCR Mix（40614-A），按下列表格配制反應(yīng)液：
試劑 | 陰性對照 | 實驗組 | 陽性對照 |
GMyc-1st PCR Mix（40614-A） | 46 µL | 46 µL | 46 µL |
待測樣本 | / | 4 µL | 4 µL |
Positive Control Template（40614-C）* | / | / | 1 µL |
表1 第一輪PCR反應(yīng)體系
*為防止40614-C污染，請先將陰性對照組和實驗組加樣完成后，再將40614-C加入陽性對照組。
b. 按下述條件進(jìn)行PCR反應(yīng)：
普通程序
94℃ 5 min
94℃ 30 sec
62℃ 30 sec 
30 cycles
72℃ 30 sec
72℃ 7 min
快速程序*
95℃ 5 min
95℃ 15 sec
60℃ 30 sec
26 cycles
*快速程序能夠縮短反應(yīng)時間，但對于靈敏度會略有影響，可自行選擇使用普通程序或者快速程序。
4）第二輪PCR：
a. 充分融解GMyc-2nd PCR Mix（40614-B），按下列表格配制反應(yīng)液：
試劑 | 陰性對照 | 實驗組 | 陽性對照 |
GMyc-2nd PCR Mix（40614-B） | 49 µL | 49 µL | 49 µL |
1st PCR反應(yīng)液（10倍稀釋液）* | 1 µL | 1 µL | 1 µL |
表2 第二輪PCR反應(yīng)體系
*第一輪PCR反應(yīng)液需經(jīng)10倍稀釋后，方可作為第二輪PCR的模板。
b. 按下述條件進(jìn)行PCR反應(yīng)：
普通程序（總時長90min）
94℃ 5 min
94℃ 30 sec
62℃ 30 sec 
30 cycles
72℃ 30 sec
72℃ 7 min
快速程序*（總時長48min）
95℃ 5 min
95℃ 15 sec
60℃ 30 sec
26 cycles
*快速程序靈敏度為5copies/µL，普通程序靈敏度為2.5 copies/µL,可以根據(jù)需要切換程序，常規(guī)情況推薦普通程序，且不同程序的循環(huán)數(shù)不請嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。
c. 反應(yīng)結(jié)束后，取7~10 μL的PCR反應(yīng)液*（無需加Loading Buffer），直接進(jìn)行1.5%瓊脂糖凝膠電泳，確認(rèn)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物**。
*以本輪（即第二輪）擴(kuò)增產(chǎn)物為準(zhǔn)進(jìn)行支原體污染情況判斷。
**根據(jù)PCR產(chǎn)物電泳條帶之有無及片段大小來分析結(jié)果（第二輪陽性對照PCR條帶大小為247bp）。
5）本試劑盒的推薦使用頻率：
檢測場景 | 推薦的檢測頻率 |
新細(xì)胞進(jìn)入實驗室 | 必檢 |
液氮保存前 | 必檢 |
定期常規(guī) | 每月檢測一次 |
發(fā)現(xiàn)污染后 | 每周檢測一次 |
發(fā)現(xiàn)細(xì)胞異常 | 隨時檢測 |
注意事項
1. 本產(chǎn)品僅作科研用途。
2. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
3. 使用本試劑前請仔細(xì)閱讀說明書，實驗應(yīng)規(guī)范操作，包括樣本處理、反應(yīng)體系的配制及加樣。
Ver.CN20241125
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