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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
初級(jí)會(huì)員·13年
19820ES03Oligo dT 磁珠
| 參考價(jià): | 面議 |
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)- 19820ES03 產(chǎn)品型號(hào)
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問次數(shù)：551更新時(shí)間：2025-02-07 13:46:20
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
|---|
產(chǎn)品介紹
產(chǎn)品描述
Oligo dT 磁珠為表面包被有Oligo dT的1 μm磁性聚合物微球，具有單分散和磁響應(yīng)性強(qiáng)等特點(diǎn)。磁珠通過Oligo dT與真核生物mRNA的poly A尾結(jié)構(gòu)互補(bǔ)配對(duì)，快速高效從總RNA、細(xì)胞裂解物和帶有poly A的體外轉(zhuǎn)錄RNA樣本中分離純化mRNA。純化的mRNA可用于RT-PCR、cDNA文庫(kù)構(gòu)建、RACE、探針雜交和轉(zhuǎn)錄組測(cè)序等應(yīng)用。
產(chǎn)品性質(zhì)
基質(zhì) | 聚合物磁珠 |
配體 | Oligo dT |
平均粒徑 | 1 μm |
磁核 | Fe3O4 |
殼層 | 聚合物 |
磁性類型 | 超順磁性 |
應(yīng)用方向 | mRNA分離純化 |
應(yīng)用方式 | 手動(dòng)/自動(dòng) |
dA30結(jié)合量 | >300 pmol/mg 磁珠 |
mRNA結(jié)合量 | ~2 μg/mg磁珠 |
磁珠濃度 | 10 mg/mL |
保存溶液 | PBS, pH 7.4, 0.05% Proclin-300 |
保存條件 | 4℃ |
保質(zhì)期 | 2年 |
運(yùn)輸和保存方法
冰袋運(yùn)輸。4℃儲(chǔ)存，有效期2年。
注意事項(xiàng)
1. 磁珠嚴(yán)禁冷凍，否則可能導(dǎo)致磁珠碎裂，影響mRNA 純化效果。
2. 所有用于mRNA提取的buffer和耗材都應(yīng)該是RNase-free，操作過程中應(yīng)佩戴一次性手套和口罩避免RNase的污染。
3. 磁珠取用前應(yīng)恢復(fù)至室溫，且充分混勻。
4. 若總RNA樣本降解嚴(yán)重，無法得到高質(zhì)量的mRNA。
5. 磁珠用量相對(duì)于樣本量不可過低，否則會(huì)導(dǎo)致mRNA回收率低和rRNA殘留過高。
6. 磁吸時(shí)間不應(yīng)少于1min，磁吸后吸棄上清液時(shí)避免損失磁珠。
7. 洗脫時(shí)可能存在磁珠殘留，吸取樣本時(shí)應(yīng)盡量避免吸入磁珠。
8. 提取到的mRNA最好立即用于RT-PCR。如果需要保存，建議將mRNA從磁珠上洗脫下來，可在洗脫液中添加RNase抑制劑，-80℃凍存。
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備
1. 自配試劑
試劑名稱 | 組分 |
結(jié)合液 | 20 mM Tris-HCl, pH 7.5, 1.0 M LiCl, 2 mM EDTA |
洗滌液 | 10 mM Tris-HCl, pH 7.5, 0.15 M LiCl, 1 mM EDTA |
洗脫液 | Nuclease-Free Water 或 10 mM Tris-HCl, pH 7.5 |
注：所有試劑都使用DEPC水配制，為避免磁珠粘附管壁可在結(jié)合液和洗滌液中添加終濃度為0.01%的Tween-20。
2. 自備設(shè)備和耗材：磁性分離架，水浴鍋或金屬浴，冰浴，漩渦振蕩器，旋轉(zhuǎn)混合儀，1.5 mL離心管(RNase-free)，微量移液器及吸頭(RNase-free)。
3. 將磁珠恢復(fù)至室溫，且充分重懸。
4. 設(shè)置水浴鍋或金屬浴為65℃。
操作方法
以使用50 μL磁珠，從100 μg總RNA中純化mRNA為例?？梢愿鶕?jù)樣本用量按比例進(jìn)行調(diào)整。
1. 使用DEPC水將100 μg總RNA的體積調(diào)整為100 μL。
注：若總RNA的濃度低于1 μg/μL，可增加樣本體積，并調(diào)節(jié)步驟6的結(jié)合液用量和樣本體積相同；或者直接使用100 μL樣本，以下步驟不變。
2. 將上述總RNA樣本于65℃變性處理5 min，立即置于冰浴。
3. 吸取50 μL均勻重懸并恢復(fù)至室溫的Oligo dT磁珠于1.5 mL離心管(RNase-free)，磁吸，吸棄保存液。
4. 使用100 μL結(jié)合液重懸磁珠，磁吸，吸棄上清液。
5. 重復(fù)步驟4。
6. 使用100 μL結(jié)合液重懸磁珠。
7. 將步驟2中處理好的總RNA樣本加入磁懸液中，混勻，室溫旋轉(zhuǎn)混合10 min。
8. 磁吸，吸棄上清液。
9. 使用200 μL洗滌液重懸磁珠，磁吸，吸棄上清液。
10. 重復(fù)步驟9。
注：使用10 μL移液器吸頭盡量吸棄上清液。
11. 加入20-100 μL洗脫液，吹打重懸磁珠，室溫混勻5min，磁吸，將純化的mRNA溶液轉(zhuǎn)移至新的EP管(RNase-free)。
注：65℃-75℃加熱洗脫，可增加洗脫效率。
檢測(cè)分析
總RNA中mRNA的含量一般為1%-5%, 可以使用Nanodrop或Qubit測(cè)量純化的mRNA濃度。
可以使用RT-qPCR或Agilent 2100 Bioanalyzer及配套的試劑檢測(cè)rRNA殘留情況。
HB230106
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