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Cell新突破：CRISPR技術(shù)助力構(gòu)建小鼠模型
2013-8-30 閱讀(236)
來自Whitehead研究所的研究人員利用基因調(diào)控系統(tǒng)CRISPR/Cas，一步操控小鼠基因組納入了報告基因和條件性等位基因。現(xiàn)在生成包含如此復(fù)雜工程等位基因的動物只需數(shù)周而非數(shù)年的時間，并可利用這些動物來構(gòu)建疾病模型及研究基因功能。這一突破性的研究發(fā)表在《細胞》（Cell）雜志上。
Whitehead研究所創(chuàng)始人Rudolf Jaenisch說：“我們以往曾利用CRISPR/Cas來突變基因，但卻無法預(yù)測這些靶向突變的特性?，F(xiàn)在我們可通過兩次切割定義特異性的缺失。我們可以一步生成條件性的小鼠，輕易及非常有效地插入達3000個堿基對的DNA 片段。而過去要構(gòu)建這樣的小鼠則需要開展更多的工作。”
CRISPR/Cas （"clustered regularly interspaced short palindromic repeat/CRISPR associated"）系統(tǒng)，是在大多數(shù)細菌以及古菌中發(fā)現(xiàn)的一種天然免疫系統(tǒng)，可用來對抗病毒以及其他病原體對細菌的入侵。科學家們近期通過利用這一防御機制，快速有效地改變了小鼠和人類細胞的基因組。然而直到現(xiàn)在，研究人員才利用CRISPR/Cas來構(gòu)建遺傳研究zui有用的一種工具：條件性突變小鼠。
一個條件性突變小鼠基因組中，包含有一個或一組可利用一種特定信號來開啟或關(guān)閉的基因。通過開啟或關(guān)閉這些基因，科學家們可以梳理某些基因在生物學功能和疾病中的作用。
此前，科學家們構(gòu)建這樣的模式生物需要利用胚胎干細胞（ESCs），且要經(jīng)歷一個復(fù)雜且耗時的過程。不幸的是，科學家們只能有效操控小鼠和大鼠的這些ESCs，這一限制阻礙了這類研究。
利用CRISPR/Cas，Jaenisch和他的實驗室構(gòu)建出了帶有條件性等位基因的小鼠，以及攜帶著多個標記基因能夠報告這些基因是否正在表達的小鼠。
研究人員的實驗還減輕了人們對于CRISPR/Cas脫靶活性的憂慮。
論文的共同作者、Jaenisch實驗室研究生Chikdu Shivalila說：“近期在人類癌細胞系中的一些研究提出了關(guān)于CRISPR/Cas特異性的擔憂，我們的研究表明非特異性的DNA切割有可能會發(fā)生，但它們是少見和可以預(yù)測的。”
Jaenisch實驗室的研究工作為未來的研究開辟了一些新途徑。
論文的共同作者、Jaenisch實驗室博士后研究人員Hui Yang說：“在這項研究中我們描述的這些方法將大大加快構(gòu)建基因修飾動物的速度。我想利用這種方法借助于CRISPR/Cas來構(gòu)建出復(fù)雜疾病的模型。”
由于CRISPR/Cas不依賴于ESCs，可以利用它來對包括家畜在內(nèi)的任何動物進行遺傳改造。
論文的共同作者、Jaenisch實驗室博士后研究人員Haoyi Wang說：“我們還沒嘗試過，但我想通過改造這一CRISPR/Cas系統(tǒng)，從而在大型動物中實現(xiàn)基因組工程操控，例如利用靈長類動物構(gòu)建疾病模型，利用牛來滿足農(nóng)業(yè)用途。”
