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北京迪科馬科技有限公司(迪馬科技)

尿液中對(duì)硝基酚的檢測(cè)——HPLC法

時(shí)間:2016-9-9 閱讀:5170
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對(duì)硝基酚是接觸硝基苯及含對(duì)硝基苯基化合物作業(yè)工人體內(nèi)的主要代謝產(chǎn)物。尿中對(duì)硝基酚濃度的測(cè)定,被認(rèn)為是生物學(xué)監(jiān)測(cè)和職業(yè)病診斷的重要指標(biāo)。尿中對(duì)硝基酚的測(cè)定方法有比色法、氣相色譜法及液相色譜法等。比色法操作煩瑣、靈敏度差;氣相色譜法雖然靈敏度高、選擇性好,但是需要將對(duì)硝基酚衍生、操作復(fù)雜、不適于大批樣品分析;近年來(lái)開(kāi)展環(huán)境樣品和尿液樣品中對(duì)硝基酚檢測(cè)主要使用HPLC方法,但是由于尿液中雜質(zhì)干擾多,導(dǎo)致凈化不好,干擾多,需要增加凈化步驟。

方法優(yōu)勢(shì)

迪馬科技開(kāi)發(fā)的《尿液中對(duì)硝基酚的檢測(cè)》,采用固相萃取-液相色譜法測(cè)定人尿中的對(duì)硝基酚,以濃鹽酸作為提取液,采用ProElut PXL 和ProElut Al-N固相萃取柱凈化樣品,通過(guò)HPLC檢測(cè);方法定量限是0.1 mg/kg。本方案前處理步驟簡(jiǎn)單、凈化效果好,基質(zhì)效應(yīng)小且檢測(cè)時(shí)間短;準(zhǔn)確度高,重現(xiàn)性好。

以下為詳細(xì)解決方案,敬請(qǐng)參考!

尿液中對(duì)硝基酚的檢測(cè)——HPLC法

1、適用范圍

本方案適用于尿液中對(duì)硝基酚的檢測(cè),本方法定量限0.1 mg/kg。

2、提取

  1. 取10 g樣品,加入2 mL濃鹽酸,沸水浴60 min,冷卻至室溫;

  2. 加入25 mL乙酸乙酯振蕩2 min,6000 rpm離心2 min;

  3. 取出上清液在40 ℃水浴條件下,減壓蒸至近干,再加入3 mL 50%甲醇水混勻,待凈化。

3、凈化—— ProElut Al-N 1 g/6 mL (Cat#:65306)上層

ProElut PXL 3 mL(Cat#:65920)下層

a活    化:

加入5 mL甲醇、5 mL 50%甲醇水,流出液棄去;

b上    樣:

將待凈化液加入小柱,流出液棄去;

c淋    洗:

加入5 mL 50%甲醇水淋洗小柱,流出液棄去,棄去上層小柱,再用3 mL 50%甲醇水淋洗下層小柱,流出液棄去;

d洗    脫:

加入3 mL甲醇,收集洗脫液;

e重新溶解:

將洗脫液在40 ℃下減壓蒸至近干,1 mL水溶解殘?jiān)^(guò)微孔濾膜供HPLC分析。

4、色譜條件

色譜柱:Diamonsil C18(2),250 mm × 4.6 mm,5 μm(Cat#:99603)

流  速:1.0 mL/min    進(jìn)樣量:20 μL   柱  溫:30 ℃

檢測(cè)器:UV 360 nm

流動(dòng)相: A:0.1%甲酸水    B:甲醇    A:B=60:40

5、添加回收結(jié)果

人尿中對(duì)硝基酚的HPLC檢測(cè)添加回收結(jié)果

分析物

添加水平(mg/kg)

回收率(%)

對(duì)硝基酚

0.1

82.30

0.5

81.69

 

對(duì)硝基酚標(biāo)準(zhǔn)品(1.0 mg L)液相色譜圖.jpg

對(duì)硝基酚標(biāo)準(zhǔn)品(1.0 mg/L)液相色譜圖

對(duì)硝基酚標(biāo)準(zhǔn)品(5.0 mg L)液相色譜圖.jpg

對(duì)硝基酚標(biāo)準(zhǔn)品(5.0 mg/L)液相色譜圖

添加水平為0.1 mg kg人尿中對(duì)硝基酚檢測(cè)的液相色譜圖.jpg

添加水平為0.1 mg/kg人尿中對(duì)硝基酚檢測(cè)的液相色譜圖

添加水平為0.5 mg kg人尿中對(duì)硝基酚檢測(cè)的液相色譜圖.jpg

添加水平為0.5 mg/kg人尿中對(duì)硝基酚檢測(cè)的液相色譜圖

 人尿中對(duì)硝基酚檢測(cè)(空白樣品)的液相色譜圖.jpg

人尿中對(duì)硝基酚檢測(cè)(空白樣品)的液相色譜圖

 

尿液中對(duì)硝基酚的檢測(cè)——HPLC法相關(guān)產(chǎn)品信息:

貨號(hào)

名稱(chēng)

規(guī)格

樣品前處理

65306

ProElut AL-N

1 g/6 mL 30/pk

65920

ProElut PXL

3mL 50/pk

244358

12管防交叉污染真空SPE萃取裝置

12位

4803

1,3,6mL柱管通用連接器

15/pk

4806

考克(控制流量)

15/pk

99011

真空/正壓兩用泵,無(wú)油

1/pk

99013

抽濾瓶套裝

(包括硅橡膠管2米,2L抽濾瓶及橡膠塞)

1/pk

30039

FitMax針頭式過(guò)濾器 Nylon

13 mm,0.22   μm 100/pk

30040

FitMax針頭式過(guò)濾器 Nylon

13 mm,0.45   μm 100/pk

標(biāo)準(zhǔn)品

12-N-10855-5G

對(duì)硝基酚[100-02-7]

5 g

色譜柱及保護(hù)柱

99603

Diamonsil   C18(2) 通用型反相色譜柱

250 × 4.6 mm,5 μm

6201

EasyGuard C18 保護(hù)柱

10 × 4.0 mm 1/pk

2個(gè)柱芯+1個(gè)柱套

HPLC溶劑?緩沖鹽?離子對(duì)試劑

50102

甲醇    HPLC級(jí)

4 L

50104

乙酸乙酯 HPLC級(jí)

4 L

50144

甲酸    HPLC級(jí)

50 mL

通用色譜產(chǎn)品

52401B

瓶架/藍(lán)色(現(xiàn)貨)

50孔

52401A

瓶架/白色(現(xiàn)貨)

50孔

1034

樣品瓶(棕色/螺紋)

2 mL,   100/pk

1035

樣品瓶蓋/含墊(已經(jīng)組裝)

100/pk

H80465

HPLC 進(jìn)樣針

25 μL

紅色產(chǎn)品貨號(hào)#30039、#30040、#1034、#1035*

 

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