人胃癌標(biāo)志物（GCM）Elisa試劑盒說(shuō)明書(shū)

本試劑盒僅供研究使用。

　　檢測(cè)范圍： 96T

　　5pg/ml-180pg/ml

　　使用目的：

　　本試劑盒用于測(cè)定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中胃癌標(biāo)志物（GCM）含量。

　　實(shí)驗(yàn)原理

　　人胃癌標(biāo)志物（GCM）Elisa試劑盒說(shuō)明書(shū)本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人胃癌標(biāo)志物（GCM）水平。用純化的人胃癌

　　標(biāo)志物（GCM）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入胃癌標(biāo)志

　　物（GCM），再與HRP 標(biāo)記的胃癌標(biāo)志物（GCM）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)

　　合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的

　　作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的胃癌標(biāo)志物（GCM）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)

　　儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人胃癌標(biāo)志物（GCM）

　　濃度。

　　試劑盒組成

　　1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶

　　2 酶標(biāo)試劑 6ml×1 瓶 8 標(biāo)準(zhǔn)品（320pg/ml） 0.5ml×1 瓶

　　3 酶標(biāo)包被板 12 孔×8 條 9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1 瓶

　　4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說(shuō)明書(shū) 1 份

　　5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張

　　6 顯色劑B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個(gè)

　　標(biāo)本要求

　　1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能

　　馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

　　2.不能檢測(cè)含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

　　操作步驟

　　1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀

　　釋。

　　160pg/ml 5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

　　80pg/ml 4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

　　40pg/ml 3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

　　20pg/ml 2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

　　10pg/ml 1 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

　　2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、

　　待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，

　　然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5 倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡

　　量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

　　3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。

　　4. 配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用

　　5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此

　　重復(fù)5 次，拍干。

　　6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

　　7. 溫育：操作同3。

　　8. 洗滌：操作同5。

　　9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

　　10 分鐘.

　　10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

　　11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD 值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止

　　液后15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

　　操作程序總結(jié)：

　　計(jì)算

　　以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD 值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的

　　OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD 值計(jì)算出標(biāo)

　　準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD 值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，

　　即為樣品的實(shí)際濃度。

　　注意事項(xiàng)

　　1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未

　　用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

　　2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

　　3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間

　　控制在5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

　　4. 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本OD 值

　　大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD 值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測(cè)定，計(jì)

　　算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

　　5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

　　6.底物請(qǐng)避光保存。

　　7.嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

　　8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

　　9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

　　保存條件及有效期

　　1.試劑盒保存：;2-8℃。

　　2.有效期：6 個(gè)月

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