本試劑盒僅供研究使用。

使用目的：本試劑盒用于測定人血清，血漿及相關(guān)液體樣本中總膽固醇（TC）含量。

   實驗原理:本試劑盒應(yīng)用間接法測定標本中人總膽固醇（TC）水平。用純化的人總膽固醇（TC）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入已知濃度的總膽固醇（TC）標準品和未知濃度的總膽固醇（TC）待檢樣品，溫育后，加入生物素標記的抗IgG抗體，再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合，形成免疫復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的總膽固醇（TC）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人總膽固醇（TC）濃度。
    試劑盒組成
1 20倍濃縮洗滌液 50ml×1瓶 
 
9 標準品S1（18 nmol/L） 0.5ml×1瓶
2 鏈霉親和素-HRP 6ml×1瓶 標準品S2（12 nmol/L） 0.5ml×1瓶
3 酶標包被板 12孔×8條 標準品S3（6 nmol/L） 0.5ml×1瓶
4 生物素標記的抗-IgG抗體 6ml×1瓶 標準品S4（3 nmol/L） 0.5ml×1瓶
5 顯色劑A液 6ml×1瓶 標準品S5（1.5nmol/L） 0.5ml×1瓶 
6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 10 密封袋 1個
7 終止液 6ml×1瓶 11 封板膜 3張
8 樣品稀釋液 6ml×1瓶 12 說明書 1份

 
   標本要求
1．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
2．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
   操作步驟
   1.根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
   2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品，其余各步操作相同）、標準品孔、待測樣品孔。然后在標準品孔中加入標準品50μl，在樣本反應(yīng)孔中先加入待測樣品10μl再加入樣品稀釋液40μl（樣品zui終稀釋度為5倍），蓋上封板膜，輕輕振蕩混勻，37℃溫育45分鐘。
   3.配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
   4.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)4次，拍干。
   5.加生物素標記的抗-IgG抗體：每孔加入生物素標記的抗-IgG抗體50μl。37℃溫育30分鐘
   6.洗滌：操作同4。
   7.加鏈霉親和素-HRP：每孔加入50μl的鏈酶親和素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
   8.洗滌：操作同4。
   9.顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
   10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
   11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
 
    計算
  以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值待入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。
    注意事項
    1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標  包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
    2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。
    3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
    4． 如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值），請先將樣本稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以稀釋倍數(shù)（×5×n）。
    5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
    6．本試劑不同批號組分不得混用。顯色劑B請避光保存。
    7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
    8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
    9. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。
    線形范圍： 1nmol/L -20nmol/L
    規(guī)格：96人份/盒
    保存條件及有效期
    1．試劑盒保存：；2-8℃。
    2．有效期：6個月
 

http://www.sh-yapubio.com/