賽默飛 Countess 3 FL 自動細胞計數(shù)儀 是一款高精度、自動化的細胞計數(shù)和分析工具，結合了熒光顯微鏡技術和先進的圖像分析功能。以下是使用 Countess 3 FL 自動細胞計數(shù)儀的詳細教程，幫助用戶快速上手并有效利用儀器進行細胞分析。

1. 開始前準備

在使用Countess 3 FL之前，確保儀器和樣本準備好。

1.1 儀器準備

1. 接通電源：確保儀器連接電源，并開啟電源按鈕。

2. 檢查儀器狀態(tài)：在儀器啟動后，等待系統(tǒng)自檢完成。此時屏幕上會顯示儀器的歡迎界面，確認沒有錯誤提示。

3. 清潔樣本腔和顯微鏡鏡頭：使用適當?shù)那鍧嵐ぞ撸ㄈ鐭o塵布和清潔液）清潔儀器的顯微鏡鏡頭和樣本腔，避免灰塵影響結果。

1.2 樣本準備

1. 準備細胞懸液：確保細胞懸液均勻，必要時使用離心機沉淀細胞，去除上清液。

2. 選擇適當?shù)娜玖?/strong>：根據(jù)需要使用臺盼藍或熒光染料（如Calcein-AM、PI等），將染料加入細胞懸液中，幫助區(qū)分活細胞與死細胞。

2. 操作步驟

2.1 啟動儀器

1. 打開 Countess 3 FL，并觸摸屏幕上的 "Start" 按鈕進入主菜單。

2. 在主菜單中，選擇適合你實驗的計數(shù)模式（如臺盼藍染色、熒光染料分析等）。

2.2 樣本加載

1. 將準備好的細胞懸液輕輕滴入計數(shù)板或樣品腔。確保液體的表面平整，避免氣泡干擾。

2. 使用Countess 3 FL的專用樣品腔蓋住樣品，確保沒有氣泡。插入樣品腔到儀器的掃描區(qū)域。

2.3 設置計數(shù)參數(shù)

1. 選擇適合的實驗模式：

• 普通細胞計數(shù)模式：選擇“臺盼藍”或其他染料檢測活死細胞的模式。

• 熒光染料模式：如果使用了熒光染料（如Calcein-AM、PI等），選擇相應的熒光通道（如綠色或紅色），以便通過熒光信號分析細胞活性。

2. 調(diào)整其他實驗設置（如增益、曝光時間等），以確保熒光信號清晰可見，細胞圖像清晰。

2.4 運行計數(shù)

1. 按下 “Start Counting” 按鈕，儀器將自動開始圖像采集與分析。Countess 3 FL會掃描樣品中的細胞圖像，并進行自動識別和計數(shù)。

2. 在分析過程中，Countess 3 FL會自動顯示細胞數(shù)量、活細胞和死細胞的比例、細胞大小分布等數(shù)據(jù)。

2.5 查看分析結果

1. 分析完成后，儀器會自動生成詳細的結果報告，并顯示在觸摸屏上。

2. 查看報告：報告包括細胞總數(shù)、活細胞數(shù)、死細胞數(shù)、活細胞比例等。你還可以查看細胞的大小分布、形態(tài)等詳細信息。

3. 調(diào)整報告設置：根據(jù)需要，您可以選擇導出數(shù)據(jù)或調(diào)整報告設置。

2.6 導出數(shù)據(jù)

1. 點擊“Export”按鈕，將實驗數(shù)據(jù)導出為 CSV 格式文件。

2. 通過USB或網(wǎng)絡將文件轉移到電腦上，以進行進一步分析。

3. 高級功能與設置

3.1 多通道熒光染料分析

如果您正在使用多個熒光染料（如Calcein-AM、PI、Hoechst等），可以選擇適當?shù)臒晒馔ǖ肋M行細胞分析：

1. 在設置中選擇“Fluorescent Mode”并每個通道的染料類型。

2. 儀器會自動切換不同的熒光通道，識別不同的細胞群體（例如，活細胞、死細胞、細胞核等）。

3.2 細胞大小和形態(tài)分析

通過細胞大小和形態(tài)分析功能，您可以評估細胞的健康狀況和群體分布：

1. 選擇“Size Distribution”模式，儀器會根據(jù)細胞大小對樣本進行分類，并生成直方圖。

2. 進一步分析細胞的形態(tài)特征，觀察細胞是否有異常形態(tài)（如細胞碎片等）。

4. 維護與保養(yǎng)

4.1 清潔

定期清潔Countess 3 FL儀器，特別是顯微鏡鏡頭和樣品腔：

1. 用無塵布清潔顯微鏡鏡頭，避免灰塵和污漬影響圖像質(zhì)量。

2. 清潔樣品腔，確保沒有殘留的樣品或染料，避免交叉污染。

4.2 校準

Countess 3 FL具有自動校準功能，但建議定期進行校準檢查，確保儀器的計數(shù)結果準確：

1. 使用標準細胞懸液進行校準，檢查儀器計數(shù)的準確性。

2. 根據(jù)儀器使用頻率，建議每隔一段時間重新校準。

4.3 軟件更新

定期檢查并更新儀器的操作系統(tǒng)和分析軟件：

1. 根據(jù)賽默飛公司發(fā)布的軟件更新通知，下載并安裝最新的軟件版本，確保儀器的功能和性能得到優(yōu)化。

5. 常見問題解答

5.1 儀器無法啟動

• 確保電源插頭連接正確，電源開關已打開。

• 檢查電源指示燈是否亮起，確保電源正常。

5.2 樣本圖像模糊

• 檢查顯微鏡鏡頭是否干凈，如有灰塵，使用無塵布輕輕擦拭。

• 檢查樣品腔，確保沒有氣泡，并確保樣本液面平整。

5.3 計數(shù)結果與預期差異

• 檢查染料的使用是否正確，確保染料與細胞的匹配。

• 確保選擇了正確的計數(shù)模式，并且設置了合適的參數(shù)（如熒光增益、曝光時間等）。

• 確保樣品均勻，并且細胞濃度在適合儀器測量的范圍內(nèi)。

總結

賽默飛Countess 3 FL自動細胞計數(shù)儀通過自動化操作、熒光顯微技術、智能圖像分析，提供高效、精確的細胞計數(shù)和分析功能。通過本文提供的步驟，您可以快速上手并有效利用Countess 3 FL進行細胞研究。定期維護、更新和適當?shù)脑O置調(diào)整，能夠確保儀器長期穩(wěn)定地為您提供精準的實驗結果。