CY5.5-卵清蛋白（Cy5.5 labeled ovalbumin）是一種重要的熒光標(biāo)記物，由近紅外熒光染料CY5.5與卵清蛋白（ovalbumin，OVA）通過(guò)化學(xué)方法共價(jià)連接而成。以下是關(guān)于CY5.5-卵清蛋白的詳細(xì)介紹：

一、組成成分

CY5.5-卵清蛋白由兩部分組成：

1. 近紅外熒光染料CY5.5：

• 性質(zhì)：具有優(yōu)異的光學(xué)特性，其激發(fā)波長(zhǎng)約為675nm，發(fā)射波長(zhǎng)約為695~710nm，處于近紅外區(qū)域。

• 作用：作為熒光標(biāo)記物，使CY5.5-卵清蛋白在生物成像中具有更深的組織穿透能力和更低的背景自發(fā)熒光干擾。

2. 載體蛋白卵清蛋白：

• 性質(zhì)：一種常用的生物大分子載體，具有多個(gè)反應(yīng)性位點(diǎn)，如賴氨酸殘基上的氨基，可以與CY5.5的活性基團(tuán)（如NHS酯）進(jìn)行共價(jià)連接。

• 來(lái)源：通常從雞蛋清中提取，分子量約為43kDa。

• 作用：作為CY5.5的載體，提高其在體內(nèi)的穩(wěn)定性和生物相容性。

二、合成方法

CY5.5標(biāo)記卵清蛋白的過(guò)程通常包括以下幾個(gè)步驟：

1. 將CY5.5-NHS酯溶解在少量無(wú)水有機(jī)溶劑（如DMSO或DMF）中，確保其在水溶液中不會(huì)快速水解。

2. 在緩沖溶液中（如pH 8.0左右的PBS緩沖液）加入適量的卵清蛋白溶液。

3. 緩慢加入CY5.5-NHS酯溶液到卵清蛋白溶液中，同時(shí)輕輕攪拌，以促進(jìn)酯與蛋白質(zhì)氨基的偶聯(lián)反應(yīng)。通常在室溫或冰浴條件下反應(yīng)1~2小時(shí)。

4. 調(diào)整pH值以保持在8.0附近，有助于提高酰胺鍵的形成效率。

5. 使用凝膠過(guò)濾或透析的方法去除未反應(yīng)的CY5.5-NHS酯和其他小分子。

6. 純化后得到的CY5.5標(biāo)記卵清蛋白可以通過(guò)吸光度和熒光光譜測(cè)定標(biāo)記效率。

三、特性與應(yīng)用

1. 熒光特性：由于CY5.5染料的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)處于近紅外區(qū)域，使得CY5.5-卵清蛋白在生物成像中具有更深的組織穿透能力和更低的背景自發(fā)熒光干擾，從而提高成像的清晰度和準(zhǔn)確性。

2. 光穩(wěn)定性：CY5.5染料在生理?xiàng)l件下穩(wěn)定，不易受到光漂白的影響，能夠保持長(zhǎng)時(shí)間的熒光信號(hào)。這使得CY5.5-卵清蛋白在長(zhǎng)時(shí)間的成像實(shí)驗(yàn)中仍能保持穩(wěn)定的熒光強(qiáng)度，適用于活體成像和實(shí)時(shí)檢測(cè)。

3. 生物兼容性：CY5.5是水溶性染料，易于與蛋白質(zhì)結(jié)合，且通常不會(huì)顯著影響蛋白質(zhì)的功能或結(jié)構(gòu)。卵清蛋白也具有良好的生物相容性，因此CY5.5-卵清蛋白在生物體內(nèi)應(yīng)用中具有較高的安全性。

4. 應(yīng)用：

• 生物成像：可用于熒光顯微鏡觀察、流式細(xì)胞分析、蛋白質(zhì)印跡等應(yīng)用中。通過(guò)與特定的抗體結(jié)合，可以用于檢測(cè)組織或細(xì)胞中的抗原，實(shí)現(xiàn)熒光成像和定量分析。

• 藥物研發(fā)：CY5.5-卵清蛋白的近紅外熒光發(fā)射特性使其能夠穿透生物組織，因此特別適合用于體內(nèi)成像和藥物分布、代謝等方面的研究。通過(guò)監(jiān)測(cè)CY5.5-卵清蛋白在體內(nèi)的分布和代謝情況，可以為藥物研發(fā)提供重要的信息。

• 免疫研究：卵清蛋白作為常用的載體蛋白，具有良好的免疫原性。CY5.5-卵清蛋白可用于免疫學(xué)研究，如作為免疫原制備抗體、研究免疫反應(yīng)等。

四、注意事項(xiàng)

1. CY5.5-卵清蛋白通常僅用于科學(xué)研究實(shí)驗(yàn)，不適合人類或獸醫(yī)使用。

2. 在使用過(guò)程中應(yīng)嚴(yán)格遵循實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)范，確保人身安全和實(shí)驗(yàn)效果。

3. 儲(chǔ)存時(shí)應(yīng)在適當(dāng)?shù)牡蜏貤l件下保存，以保持其穩(wěn)定性和活性。

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