“XXXX”動物外周血白細胞分離液實驗方法

（細胞培養(yǎng)及分子生物學(xué)）

【產(chǎn)品規(guī)格】

200ml/Kit

【產(chǎn)品組成】

為方便廣大用戶使用，試劑內(nèi)容如下：

無菌膠頭滴管或塑料滴管

【檢驗方法】

全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行。

首先取抗凝血，根據(jù)樣本量大小，分以下兩種情況：

情況 A：血液樣本量小于 5ml 時，實驗方法如下：

1.取一支 15ml 離心管，先加入 5ml 分離液

2.用吸管小心吸取血液樣本加于分離液液面上，400-500g，離心 20-30min（注：如改變血液樣本及分離液用量，需相應(yīng)調(diào)整離心力及離心時間，具體離心條件需客戶自行摸索，以達到*分離效果。）

3.離心后用吸管小心吸取所有環(huán)狀乳白色細胞層（一層或兩層），加入 10 ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118），混勻細胞。250g，離心 10min。重復(fù)洗滌 2-3 次，即得所需白細胞。

4.如有紅細胞殘留請使用紅細胞裂解液（產(chǎn)品編號：NH4CL2009）裂解紅細胞，具體操作方法詳見“紅細胞裂解液使用說明”。

情況 B：血液樣本量大于等于 5ml 時，實驗方法如下：

1.取一支適當(dāng)?shù)碾x心管，先加入與樣本等量的分離液。

2.將血液樣本小心加于分離液之液面上，450-650g（zui大離心力可至 1000g），離心20-30min。（注：根據(jù)血液樣本量確定離心條件，血液量越多，離心力越大，離心時間越長，具體離心條件需客戶自行摸索，以達到*分離效果。加入血液樣本后，樣本及分離液總體積不得超過離心管總體積的三分之二）。

3.剩余步驟同“情況 A”中步驟 3 與步驟 4。

【注意事項】

1.全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行。為獲得*的實驗結(jié)果，在取血 2h 內(nèi)進行實驗，血液存放時間越長，細胞分離效果越差。血液放置超過 6h 后分離效果更差甚至不能達到分離目的。

2.本實驗不要使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品，應(yīng)使用無靜電、低靜電離心管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品，因為靜電作用將導(dǎo)致細胞貼壁、堿處理的玻璃表面會變成毛面，影響細胞分離效果。

3.分離液用量大于稀釋后血液樣本時，分離效果更佳。

4.當(dāng)血液樣本粘度過高需稀釋時，*稀釋方法：將血液與樣本稀釋液（產(chǎn)品編號：2010C1119）1:1 稀釋混勻備用。注：不當(dāng)?shù)南♂尫椒〞档图毎寐始盎钚?。如血液樣本?jīng)過稀釋則分離過程中需適當(dāng)降低離心力和離心時間。

5.如實驗后細胞得率或活性過低，請?zhí)旖驗笠詫で髱椭?，具體詳見下方生產(chǎn)企業(yè)信息。

【儲存條件及有效期】

18-25℃保存，有效期 2 年。本品易感染細菌，需無菌條件操作。無菌條件下操作，啟封后置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果。

【參考值（參考范圍）】

本實驗白細胞提取率及純度大于 80%。

下表為成年人外周血中各種細胞的數(shù)量及比例，用戶可適當(dāng)進行參考。

【相關(guān)實驗技術(shù)方案】

1.所獲得白細胞的培養(yǎng)技術(shù)。

2.所獲得白細胞的核酸提取技術(shù)。

3.所獲得白細胞的鑒定方法A.流式細胞技術(shù)B.免疫組化技術(shù)C.原位雜交技術(shù)D.PCR 技術(shù)

【可能存在的問題及解決方法】

1.由于血液粘度、細胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示：

2.本分離液分離細胞的原理為密度梯度離心，其密度與溫度、大氣壓等密切相關(guān)。不同地區(qū)客戶可根據(jù)當(dāng)?shù)厍闆r對離心條件進行適當(dāng)調(diào)整。建議對離心條件進行調(diào)整時，恒定離心時間，對離心轉(zhuǎn)速進行調(diào)整。

3.本分離液依照標(biāo)準(zhǔn)，全部使用藥用級原料，性能指標(biāo)與國產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同，可能出現(xiàn)紅細胞沉降不*的情況，可以適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速。

注：在對離心條件進行調(diào)整時，離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g 為基數(shù)，直至達到*分離效果，

離心力zui小不得小于 400g，zui大不得大于 1200g。離心時間以 20-30min 為準(zhǔn)。