科學(xué)家們已經(jīng)找出多種巧妙的分子設(shè)計策略來降低上述副產(chǎn)物的產(chǎn)生。其中，經(jīng)典的要屬降低重鏈同源錯配的 KiH，即 Knob-into-hole 技術(shù)，以及降低輕鏈重鏈錯配的 CrossMab 技術(shù)。然而，所有分子設(shè)計策路都只能盡量降低某類副產(chǎn)物的產(chǎn)生，而不能消除全部的副產(chǎn)物。不僅如此，在雙抗的重組表達(dá)過程，還不可避免的會產(chǎn)生不完整的片段抗體以及聚集體。所有這些都給雙抗分子的下游工藝開發(fā)提出了挑戰(zhàn)。

Vudalimab （分子量約 125.43 kDa）是一種YBODY^®平臺工藝生產(chǎn)的二價（1:1）非對稱性的結(jié)構(gòu); 具體為靶向抗原A的單元Fab-Fc和靶向抗原B的單鏈單元ScFv-Fc 組成 (Fab-ScFv-Fc) （參見圖2）。單元A和單元B在二者Fc-CH3之間通過鹽橋（Salt-Bridge）和“杵入臼”（Knob-into-Hole）等工程改造以有效形成目標(biāo)雙抗體（heterodimer），并在鉸鏈區(qū)（hinge region）形成穩(wěn)定的鏈間二硫鍵。這些對Fc 的工程改造大大提高了目標(biāo)雙抗分子的占比，保證了雙抗體生產(chǎn)的高產(chǎn)率以及工藝和產(chǎn)品的穩(wěn)定性。

圖2. Vudalimab PD-1 × CTLA-4 雙抗示意圖^[2]

在Biozen dSEC-2（3um，7.8x300mm） 色譜柱上的分析結(jié)果可見：通過和蛋白標(biāo)準(zhǔn)品對比，Vudalimab的洗脫時間略晚于分子量150kDa的human IgG的洗脫時間；放大看Vudalimab的HMWS部分可以看到有至少三種不同分子量分布。推測為Homodimer錯配，目標(biāo)雙抗聚集體和Homodimer的聚集體等。參見圖3。

圖3. Vudalimab的聚集體和Aqueous SEC check standard的疊圖

[1]. Cytiva：雙抗的純化策略

[2]. Mark N. Stein, et, al. A Phase 2 Study of Vudalimab, a PD-1 × CTLA-4 Bispecific Antibody, Plus Chemotherapy or Targeted Therapy in Patients with Molecularly Defined Subtypes of Metastatic Castration-Resistant Prostate Cancer.