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熒光顯微鏡通過激發(fā)樣品內(nèi)部的某些細(xì)胞結(jié)構(gòu)或者分子等，使他們進(jìn)入到激發(fā)態(tài)，當(dāng)它們回到基態(tài)時，會釋放出可見光區(qū)的光，通過放大并檢測此熒光來生成圖像。因?yàn)闊晒庵粡谋患ぐl(fā)的分子發(fā)射出來，所以它可以提供高度選擇性的成像能力。
優(yōu)點(diǎn)：
1、高靈敏度：可檢測單分子水平的熒光信號。
2、高特異性：通過熒光標(biāo)記實(shí)現(xiàn)目標(biāo)分子的選擇性觀察。
3、多通道成像：可同時檢測多種熒光標(biāo)記。
4、非侵入性：適用于活細(xì)胞成像。
缺點(diǎn)：
1、光漂白：熒光物質(zhì)在持續(xù)激發(fā)下會逐漸淬滅。
2、光毒性：高強(qiáng)度激發(fā)光可能損傷活細(xì)胞。
3、背景熒光：樣品自發(fā)熒光或雜質(zhì)熒光可能干擾觀察。
4、成本高：設(shè)備昂貴，維護(hù)復(fù)雜。
熒光顯微鏡用于研究細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的吸收、運(yùn)輸、化學(xué)物質(zhì)的分布及定位等。細(xì)胞中有些物質(zhì)，如葉綠素等，受紫外線照射后可發(fā)熒光；另有一些物質(zhì)本身雖不能發(fā)熒光，但如果用熒光染料或熒光抗體染色后，經(jīng)紫外線照射亦可發(fā)熒光，熒光顯微鏡就是對這類物質(zhì)進(jìn)行定性和定量研究的工具之一。通過熒光標(biāo)記技術(shù)實(shí)現(xiàn)了對生物和非生物樣本的高靈敏度、高特異性觀察。其類型多樣，應(yīng)用廣泛，從常規(guī)細(xì)胞觀察到超分辨率成像，均可滿足不同研究需求。
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