一、背景及概述

內皮細胞系指血管、淋巴管的內膜上皮將內腔面覆蓋的細胞。多數(shù)是單層扁平上皮屬中胎葉性的上皮。血液循環(huán)和組織中大單核的游走的吞噬細胞有人認為是來自增生的血管內皮。小鼠肺微血管內皮細胞分離自肺組織；肺是機體的呼吸器官，位于胸腔，左右各一，覆蓋于心之上。肺有分葉，左二右三，共五葉。肺經肺系（指氣管、支氣管等）與喉、鼻相連，故稱喉為肺之門戶，鼻為肺之外竅。微血管內皮細胞密切參與包括再生、發(fā)育、傷口愈合等一系列生理及炎癥反應。細胞呈梭形或多角形，形成單層后呈鵝卵石樣或鋪路石樣排列。小鼠肺微血管內皮細胞構成半選擇性屏障，該屏障對于肺氣體交換，調節(jié)液體和可溶物在血液與肺間質之間的流動具有重要意義。

二、細胞傳代培養(yǎng)

將長成單層的原代細胞加0.5g/L胰蛋白酶0.2g/LEDTA后置37℃培養(yǎng)箱進行消化5min左右，鏡下觀察，當細胞間連接疏松時立即加入ECM培養(yǎng)基，吹打使細胞脫落并充分混勻，按1∶1比例傳代。

三、細胞純化

肺微血管內皮細胞在組織塊取出后，可以看到局部有成纖維細胞的生長，采取機械刮擦的方法和ECM培養(yǎng)基的定向分選功能進行純化。

四、細胞鑒定

用細胞免疫組化法檢測ⅧF-Ag和CD31膜抗原將匯合度達80%的96孔板細胞，PBS洗3次。40g/L多聚甲醛固定30min。ⅧF-Ag組需加2。5mL/LTritonx-100，30～40μL/孔，10min，PBS洗5min×3次。然后加H2O2(300mL/L的H2O2甲醇=1∶50)，室溫30min，PBS洗5min×3次。BSA封閉30min。吸去BSA，直接加CD31和ⅧF-Ag，對照組加相同體積的PBS，蓋底即可，4℃過夜。第2日，吸去一抗，PBS洗5min×3次。加二抗，室溫20min，PBS洗5min×3次。加SABC30～40μL/孔，室溫20min，PBS洗5min×4次。加DAB30～40μL/孔，5～30min，顯微鏡觀察染色程度。PBS洗3～5次。蘇木精染色1～2min，用熒光倒置顯微鏡拍照，BiosensDigitalImagingSystem灰度掃描儀掃描以檢測ⅧF-Ag和CD31膜抗原水平。

五、相關研究

有實驗研究藻酸雙酯鈉(PSS)對脂多糖(LPS)所致的小鼠肺微血管內皮細胞(PMVEC)損傷的保護作用。方法體外培養(yǎng)PMVEC，隨機將細胞分為空白對照組(C組)、LPS刺激組(L組)、PSS+LPS組(LP組)。采用MTT法檢測PSS對LPS刺激PMVEC的細胞活力的影響，虎紅染色法測定中性粒細胞(PMN)對PMVEC黏附數(shù)量的影響，酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)法檢測3組培養(yǎng)上清液中腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和細胞間黏附分子-1(ICAM-1)的濃度。結果PSS能抑制LPS所致的PMVEC細胞活力下降；與C組比較，L組的PMVEC與PMN的黏附數(shù)量明顯增加，TNF-α和ICAM-1的表達顯著增加；與L組比較，PSS預處理1h能顯著降低LPS所致的PMVEC與PMN的黏附，LP組的TNF-α和ICAM-1表達顯著降低。結論PSS能抑制LPS對PMVEC的損傷及PMVEC與PMN的黏附，其作用機制可能與降低ICAM-1和TNF-α的表達有關。

此外，還有實驗研究熱打擊及10%中暑小鼠血清刺激肺微血管內皮細胞(PMVECs)對PMVECs表達血管內皮黏附分子(VCAM-1)和細胞間黏附分子(ICAM-1)水平及其黏附單核細胞能力的影響。

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