語純生物無外泌體胎牛血清與Gibco無外泌體胎牛血清對比報(bào)告

一.實(shí)驗(yàn)材料

無外泌體胎牛血清(語純生物)，無外泌體胎牛血清(GibcoA27208-03)，BMSC(CTCC)，DMEM高糖培養(yǎng)基(HycloneSH30243.01B)，100X青霉素-鏈霉素溶液(上海生工E607011-0100)，0.25%胰酶(碧云天C0201)，0.22μm濾膜(Millex)，外泌體提取試劑盒(貝博BB-3901-1)

二.實(shí)驗(yàn)儀器

細(xì)胞培養(yǎng)箱(ThermoScientific8000)，光學(xué)顯微鏡(上海精密儀器儀表有限公司XDS-1A)，倒置顯微鏡(OLYMPUS,IX71)，超凈工作臺(tái)(上海滬凈醫(yī)療器械有限公司SW-CJ-2D)，電熱恒溫水浴槽(賀德DK-08D)，超高速離心機(jī)(BeckmanOptinal-90K)

三.無外泌體胎牛血清制備方法

1.制備工藝和參數(shù)略；

2.用0.1μm的濾膜過濾上清液，即得無外泌體胎牛血清。

四.外泌體制備及鑒定

1.BMSC細(xì)胞在正常含FBS的培養(yǎng)基中培養(yǎng)一定的時(shí)間后，細(xì)胞融合度約為60%-70%時(shí)，移去原有含血清的培養(yǎng)基，分別換成語純生物無外泌體胎牛血清和Gibco無外泌體胎牛血清；

2.繼續(xù)培養(yǎng)48h左右，細(xì)胞融合度達(dá)到80%-95%左右時(shí)收取上清液；

3.用外泌體提取試劑盒進(jìn)行外泌體提??；

4.通過電鏡和WesternBlot技術(shù)進(jìn)行外泌體鑒定，結(jié)果顯示語純生物無外泌體胎牛血清和Gibco無外泌體胎牛血清制備外泌體的效果基本一致。