腫瘤單細(xì)胞制備方法除了使用美天旎 Tumor Dissociation Kit 這種基于酶解的方法外,還有以下幾種常見的方法:
機(jī)械解離法
操作方式:通過物理手段,如使用剪刀、鑷子等器械將腫瘤組織剪碎,再利用研磨、勻漿等方式進(jìn)一步破碎組織,使細(xì)胞分散?;蛘呤褂媒M織研磨器、勻漿器等儀器,對(duì)腫瘤組織進(jìn)行機(jī)械研磨和勻漿處理,從而獲得單細(xì)胞懸液。
優(yōu)缺點(diǎn):優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)單、成本低,不需要特殊的試劑。缺點(diǎn)是容易造成細(xì)胞損傷,細(xì)胞活性和得率較低,而且對(duì)于質(zhì)地較硬的腫瘤組織,解離效果可能不佳。
化學(xué)解離法
操作方式:利用化學(xué)試劑破壞細(xì)胞間的連接,使腫瘤組織分散成單細(xì)胞。常用的試劑如胰蛋白酶、乙二胺四乙酸(EDTA)等。胰蛋白酶能夠水解細(xì)胞間的蛋白質(zhì)連接,EDTA 則可以螯合細(xì)胞外的鈣離子,破壞細(xì)胞間的鈣依賴連接。通常是將腫瘤組織切成小塊,放入含有胰蛋白酶或 EDTA 的消化液中,在適宜的溫度和時(shí)間條件下進(jìn)行消化,使細(xì)胞解離。
優(yōu)缺點(diǎn):優(yōu)點(diǎn)是解離效率較高,能夠快速獲得大量單細(xì)胞。缺點(diǎn)是化學(xué)試劑可能對(duì)細(xì)胞表面抗原和細(xì)胞功能產(chǎn)生影響,而且消化時(shí)間和試劑濃度需要嚴(yán)格控制,否則容易導(dǎo)致細(xì)胞過度消化而死亡。
流式細(xì)胞儀分選法
操作方式:先將腫瘤組織制備成單細(xì)胞懸液,然后標(biāo)記細(xì)胞表面的特異性抗原,使用流式細(xì)胞儀根據(jù)細(xì)胞的大小、粒度以及表面抗原的表達(dá)情況,對(duì)單細(xì)胞進(jìn)行分選。通過流式細(xì)胞儀的激光檢測(cè)和細(xì)胞分類裝置,將不同特征的細(xì)胞分離開來,收集到特定的細(xì)胞群體,從而獲得純凈的單細(xì)胞懸液。
優(yōu)缺點(diǎn):優(yōu)點(diǎn)是能夠精確地分離出特定類型的腫瘤細(xì)胞,純度高,可同時(shí)對(duì)多個(gè)參數(shù)進(jìn)行分析和分選。缺點(diǎn)是儀器設(shè)備昂貴,操作復(fù)雜,需要專業(yè)人員進(jìn)行操作,而且對(duì)于細(xì)胞懸液的質(zhì)量要求較高,細(xì)胞濃度和活性會(huì)影響分選效果。
微流控技術(shù)
操作方式:利用微流控芯片,將腫瘤組織單細(xì)胞懸液引入芯片的微通道中。通過微通道內(nèi)的物理結(jié)構(gòu)和流體力學(xué)原理,實(shí)現(xiàn)單細(xì)胞的捕獲、分離和培養(yǎng)。例如,利用微柱陣列、液滴微流控等技術(shù),將單個(gè)細(xì)胞包裹在微小的液滴或微腔室中,實(shí)現(xiàn)單細(xì)胞的分離和培養(yǎng)。
優(yōu)缺點(diǎn):優(yōu)點(diǎn)是能夠在微觀尺度上精確操控細(xì)胞,實(shí)現(xiàn)高通量的單細(xì)胞分析,所需樣本量少,對(duì)細(xì)胞的損傷小。缺點(diǎn)是芯片的制備和操作較為復(fù)雜,技術(shù)難度高,成本也相對(duì)較高,而且通量有限,難以處理大量的腫瘤組織樣本。