試劑簡(jiǎn)介

Calcein Red, AM 鈣黃綠素紅（紅色）是用于標(biāo)記和檢測(cè)活細(xì)胞細(xì)胞功能的熒光探針之一。Calcein Red, AM自身無(wú)熒光，具有細(xì)胞膜滲透性。

一旦進(jìn)入細(xì)胞后，被細(xì)胞內(nèi)酯酶水解為鈣黃綠素紅（Calcein Red），能與胞內(nèi)鈣離子結(jié)合，產(chǎn)生強(qiáng)烈的紅色熒光（Ex/Em=560/574），用標(biāo)準(zhǔn)的TRITC/Cy3濾片設(shè)置檢測(cè)。

Calcein Red AM對(duì)濕度敏感，粉末保存要保持干燥。Calcein Red AM儲(chǔ)存液需要分裝避光凍存，且須緊緊密封蓋子，干燥保存。Calcein Red AM工作液須現(xiàn)配現(xiàn)用。

試劑信息

同義名：Calcein Red Acetoxymethyl ester鈣黃綠素紅乙酰甲酯；

分子量：1015.79

純度：≥95%（HPLC）

Ex/Em：560/574nm

溶解性：溶于DMSO（1~5mM）

儲(chǔ)存條件：-20℃避光干燥

Calcein Red, AM 鈣黃綠素紅染色步驟

大多數(shù)實(shí)驗(yàn)中Calcein Red AM的工作濃度為2-5μM。

由于不同細(xì)胞系的染色條件不同，初次實(shí)驗(yàn)建議做梯度實(shí)驗(yàn)，以確定Calcein Red AM的工作濃度，使用低探針濃度得到的熒光結(jié)果為篩選原則。

（1）取一管適量分裝的儲(chǔ)存液（1000×）置于室溫，至少回溫20min，低速離心后，用合適的緩沖液如PBS，HBSS-HEPES稀釋到1×染色工作液。

（2）對(duì)于貼壁細(xì)胞，先用胰酶-EDTA消化細(xì)胞，離心收集細(xì)胞（1000 rpm，3min）。對(duì)于懸浮細(xì)胞，直接離心收集細(xì)胞。

（3）去上清，用緩沖液清洗細(xì)胞2~3次，充分去除殘留的酯酶活性。

（4）用1/10細(xì)胞培養(yǎng)基體積的Calcein Red AM染色工作液重懸細(xì)胞，37℃孵育20min～1h。

（5）用PBS（或者其他緩沖液）洗滌細(xì)胞兩次去除多余染料。

（6）用含合適濾光片（Ex/Em= 560nm/574nm）的儀器進(jìn)行檢測(cè)。

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