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使用制備液相色譜有哪些技巧

來源:Gilson中國-吉爾森實驗儀器(上海)有限公司   2023年03月07日 18:11  
  制備色譜是以分離出純物質為目的的色譜系統(tǒng),分析色譜是以分析出樣品組分信息為目的的色譜系統(tǒng),基于他們目的的不同,制備色譜相對于分析色譜有很多不同特征,不能簡單等同。
  使用制備液相色譜時有哪些技巧。
  一、快速液相色譜純化
  使用快速色譜法進行純化的缺點是該方法固有的分辨率較低。快速液相色譜柱使用更大的粒徑和柱容量,允許使用更多的起始材料,但以分辨率和純度為代價。如果化合物不需要更高的純度,或者如果下一步將進行 HPLC,這可能是您的選擇。
  1、確定溶劑系統(tǒng)
  樣品的純度(即混合物中有多少化合物)可以使用薄層色譜法 (TLC) 和組分的相對極性進行定性測定。使用 TLC 預先篩選最佳流動相和固定相將節(jié)省時間和金錢。根據(jù)所使用的溶劑,您可能需要在通風柜中運行色譜柱,因為存在潛在的危險煙霧。
  2、確定要使用的列
  選擇分離柱時要考慮樣品量。色譜柱裝載量因粒徑和體積而異。一般來說,快速液相色譜柱的最大裝載量約為硅膠重量的 10%。較大的色譜柱能夠處理千克數(shù)量的色譜柱,但如果您沒有那么多起始材料,那么您只會在硅膠和額外的溶劑上浪費金錢來運行這些大型色譜柱。在確定液相分析柱、基質和溶劑后,您就可以進行快速分離了。
  3、液相色譜柱
  無論您是自己裝柱還是購買一根預裝柱,按重量計算硅膠與化合物的比例(即硅膠:化合物)都將幫助您實現(xiàn)更有效的分離。
  二、HPLC純化
  在 HPLC 上運行樣品相當簡單,因為在快速液相色譜柱上預純化過程中確定的許多參數(shù)都可以應用于此過程。如果您在沒有預純化步驟的情況下運行 HPLC 分離,請考慮使用上面列出的指南來開發(fā)合適的 HPLC 方法。使用 HPLC 時的另一個考慮因素是計算的背壓。由于 HPLC 色譜柱的粒徑更小,可實現(xiàn)更高質量的分離,因此這些系統(tǒng)往往在高壓條件下運行,而閃蒸分離的壓力相對較低。使用有關粒徑和形狀、色譜柱內徑和溶劑規(guī)格的信息計算估計的背壓。

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