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選購高效液相色譜柱的方法

閱讀：5140 發(fā)布時(shí)間：2020-4-3
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　目前在高效液相色譜中，分離效果好壞的一個(gè)重要指針是色譜填料的正確選擇，主要涉及到以下幾種填料：

1)硅膠基質(zhì)填料

1、正相色譜正相色譜用的固定相通常為硅膠(Silica)以及其它具有極性官能團(tuán)，如胺基和氰基的鍵合相填料。由于硅膠表面的硅羥基或其它極性基團(tuán)極性較強(qiáng)，因此，分離的次序是依據(jù)樣品中各組分的極性大小，即極性較弱的組份*先被沖洗出色譜柱。正相色譜使用的流動(dòng)相極性相對(duì)比固定相低，如正己烷，氯*，二氯甲烷等。

2、反向色譜反向色譜用的填料常是以硅膠為基質(zhì)，表面鍵合有極性相對(duì)較弱官能團(tuán)的鍵合相。反向色譜所使用的流動(dòng)相極性較強(qiáng)，通常為水、緩沖液與甲醇、乙腈等的混合物。樣品流出色譜柱的順序是極性較強(qiáng)的組分*先被沖洗出，而極性較弱的組分在色譜柱上有更強(qiáng)的保留。常用的反向填料有C18、C8、C4等。

2)聚合物填料

聚合物填料多為聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸脂等，其重要優(yōu)點(diǎn)是在PH值為1-14均可使用。相對(duì)于硅膠基質(zhì)的C18填料，這類填料具有更強(qiáng)的疏水性;大孔的聚合物對(duì)蛋白質(zhì)等樣品的分離非常有效?，F(xiàn)有的聚合特填料的缺點(diǎn)是相對(duì)硅膠基質(zhì)填料，色譜柱柱效較低。

3)其它無機(jī)填料

其它HPLC的無機(jī)填料色譜柱也已經(jīng)商品化，由于其特殊的性質(zhì)，一般僅限于特殊的用途。如石墨化碳黑正逐漸成為反向色譜柱填料。這種填料的分離不同于硅膠基質(zhì)烷基鍵合相，石墨化碳的表面即是保留的基礎(chǔ)，不再需其它的表面改性。該柱填料一般比烷基鍵合相硅膠或多孔聚合物填料的保留能力更強(qiáng)。石墨化碳可用于分離某些幾何異構(gòu)體，由于在HPLC流動(dòng)相中不會(huì)被溶解，這類柱可在任何PH與溫度下使用。氧化鋁也可以用于HPLC。氧化鋁微粒剛性強(qiáng)，可制成穩(wěn)定的色譜柱柱床，其優(yōu)點(diǎn)是可以在PH高達(dá)12的流動(dòng)相中使用。但由于氧化鋁與堿性化合物的作用也很強(qiáng)，應(yīng)用范圍受到一定限制，所以未能廣泛應(yīng)用。新型色譜氧化鋯基質(zhì)填料也可用于HPLC。商品化的只有聚全物涂層的多孔氧化鋯微球色譜柱，應(yīng)用PH1-14，溫度可達(dá)100℃。由于氧化鋯填料是近幾年才開始研究，加之面臨的實(shí)驗(yàn)難度，其重要用途與優(yōu)勢(shì)尚在進(jìn)行之中。

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