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  在這部分工作中，我們采用了高 pH 反相色譜結(jié)合二氧化鈦富集以及二氧化鈦富集結(jié)合強陽離子交換分級兩條技術(shù)路線來對實現(xiàn)對 Hela 細胞的磷酸化蛋白質(zhì)組的深度覆蓋。zui終我們的實驗一共鑒定到了 8,696 個蛋白質(zhì)上的近 40,000 個磷酸化位點。
  在二氧化鈦富集結(jié)合強陽離子交換分級的技術(shù)路線中，SCX 分級的梯度還值得進一步優(yōu)化，對于這種組分較少的預分級方法，階梯洗脫會是一個更好的選擇。這種大規(guī)模的磷酸化肽段富集方法對樣品的起始量要求比較高，如果樣品較少的話，建議采用二氧化鈦富集結(jié)合強陽離子交換的策略，一般 2 mg 起始蛋白就能得到較多的磷酸化位點鑒定。ThermoFisher也提供了商業(yè)化的 IMAC 試劑盒（Cat # 88300），鑒于 IMAC 和 TiO2 對磷酸化肽段富集有著較好的互補性，這兩者聯(lián)用會對磷酸化蛋白質(zhì)組的深度覆蓋達到更好的效果。