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天津市蘭博實驗儀器設(shè)備有限公司

液相色譜簡易流程圖

時間:2015-1-21 閱讀:606
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1.有機溶劑的等級

應(yīng)選用HPLC級的有機溶劑。

 

2.溶劑前處理

過濾

過濾:0.45um或更小孔徑濾膜目的:除去溶劑中的微小顆粒,避免堵塞色譜柱,尤其是使用無機鹽配制的緩沖液時。

濾膜類型:

聚四氟乙烯濾膜:適用于所有溶劑,酸和鹽。

醋酸纖維濾膜:不適用于有機溶劑,特別適用于水基溶劑。

尼龍66濾膜:適用于絕大多數(shù)有機溶劑和水溶液,可以用于強酸,不適用于二甲基甲酰胺。

再生纖維素濾膜:蛋白吸收低,同樣適用于水溶性樣品和有機溶劑。

 

脫氣

 

脫氣:除去流動相中溶解或因混合而產(chǎn)生的氣泡

氣泡對測定的影響:

(1)泵中氣泡使液流波動,改變保留時間和峰面積

(2)柱中氣泡使流動相繞流,峰變形

(3)檢測器中的氣泡產(chǎn)生基線波動

 

脫氣方法:

1、超聲脫氣

2、減壓脫氣

3、在線脫氣

 

3、樣品前處理

 

(1)使用流動相溶解樣品

--減少溶劑峰,尤其是組分峰靠近溶劑峰時尤為重要

--保證樣品在流動相中的溶解度,避免樣品在系統(tǒng)中,

尤其在柱中產(chǎn)生沉淀

(2)進(jìn)樣前使用0.45um 的濾膜進(jìn)行過濾,

如果樣品很臟,要使用0.22um的濾膜進(jìn)行過濾。

(3)對于含有復(fù)雜基質(zhì)的樣品,前處理后再進(jìn)樣。

 

4、進(jìn)樣

(1)進(jìn)樣器

•自動進(jìn)樣器

•手動進(jìn)樣器原理:(六通閥)注入方式:1)全量注入2)部分注入

 

(2)手動進(jìn)樣器的原理圖

部分注入:一般要求進(jìn)樣量zui多為定量環(huán)體積的一半,如20μl的定量環(huán)zui多進(jìn)樣10μl的樣品,并且要求每次進(jìn)樣體積準(zhǔn)確、相同。

全量注入:進(jìn)樣量zui少為定量環(huán)體積的3至5倍,即20μl的定量環(huán)zui少進(jìn)樣60至100μl的樣品,這樣才能*置換樣品定量環(huán)內(nèi)殘留的溶液,達(dá)到所要求的精密度及重現(xiàn)性。

 

5、洗脫

(1)等度洗脫

(2)梯度洗脫

使用梯度洗脫的原因:

梯度洗脫要點:

梯度洗脫:

優(yōu)點:可提高分離度、縮短分離時間、降低zui小檢測量和提高分離精度

注意事項:

(1)溶劑的純度要高,否則梯度洗脫的重現(xiàn)性差。

(2)梯度混合的溶劑互溶性要好。

(3)梯度洗脫應(yīng)使用對流動相組成變化不敏感的選擇性檢測器(如

紫外吸收檢測器或熒光檢測器),而不能使用對流動相組成變

化敏感的通用型檢測器(如示差折光檢測器)。

(4)查看空白實驗的數(shù)據(jù)。

(5)遵守分析周期(zui初的分析數(shù)據(jù)不采用)。

 

6、色譜柱的類型及適用范圍

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