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制備色譜柱分離性能測(cè)試的步驟

閱讀:2832      發(fā)布時(shí)間:2016-5-26
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對(duì)于色譜分離模式的選擇應(yīng)采用多種分析柱對(duì)分離條件進(jìn)行測(cè)試,當(dāng)有多種模式可以選擇時(shí),應(yīng)著重考慮下列因素,包括:

 

分辨率:即色譜填料對(duì)被測(cè)組分的選擇性

上樣量:即色譜填料對(duì)被測(cè)樣品的承載容量

分析速度:即對(duì)被測(cè)樣品的分離時(shí)間


制備柱分離性能測(cè)試步驟:

① 考慮到填料由分析級(jí)直接放大到制備級(jí)的因素,如果要純化大量的化合物,需要考慮分析柱的規(guī)格和可作為制備柱的填料粒徑(10µm或更大);作為在下一步純化產(chǎn)品量更大的項(xiàng)目,必須考慮選擇更大的填料粒徑和更大內(nèi)徑的色譜柱,在與分析柱相同的填料下對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行純化。

② 對(duì)分析柱(4.6mm內(nèi)徑或更?。┻x擇性的研究,應(yīng)在多種填料和多種色譜條件下進(jìn)行選擇,可以采用一些商品的液相色譜條件選擇軟件進(jìn)行多種色譜模式的比較選擇,這樣可以縮短分離條件選擇的時(shí)間。

③ 在得到*的分離條件后,需要對(duì)分析柱上樣品的承載量進(jìn)行測(cè)試,比較多種上樣量下產(chǎn)物的純度,選擇產(chǎn)物純度的zui大上樣量。

④ 選擇制備柱的規(guī)格,要依據(jù)在分析柱上得到的上樣量數(shù)據(jù),進(jìn)行放大分離,通常選擇與分析柱相同粒徑的填料和色譜柱長(zhǎng)度來(lái)達(dá)到推測(cè)制備分離的預(yù)測(cè)。放大制備柱的上樣量應(yīng)基于制備柱和分析柱的交叉截面面積的比值來(lái)進(jìn)行選擇。

⑤ 檢查制備色譜分離的結(jié)果和色譜餾出物的區(qū)域以及純度。

 

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