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實(shí)驗(yàn)小技巧丨教您幾招,治療SPE小柱“便秘”難題!

閱讀:1774      發(fā)布時(shí)間:2020-8-12
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     今天是2019年的第yi個(gè)周一,從今天開(kāi)始,安譜實(shí)驗(yàn)微xin公眾號(hào)將在每周一(法定節(jié)假日除外)準(zhǔn)時(shí)發(fā)布一條干貨,力爭(zhēng)從用戶(hù)視角出發(fā),用更多更全面的專(zhuān)業(yè)內(nèi)容,為廣大實(shí)驗(yàn)室科研人員搭建一個(gè)實(shí)用、專(zhuān)業(yè)的學(xué)習(xí)平臺(tái),歡迎大家持續(xù)關(guān)注!

     好了,現(xiàn)在就開(kāi)始今天的干貨放送吧!

 

小柱“便秘”怎么辦?

     在進(jìn)入主題之前,先簡(jiǎn)單介紹下固相萃?。⊿PE)技術(shù)。

 

     固相萃取(Solid Phase Extraction,簡(jiǎn)稱(chēng) SPE)技術(shù),發(fā)展于上世紀(jì) 70 年代,由于其具有高效、可靠、消耗試劑少等優(yōu)點(diǎn),在許多領(lǐng)域取代了傳統(tǒng)的液-液萃取而成為樣品前處理的有效手段, 在實(shí)驗(yàn)室中得到了越來(lái)越廣泛的應(yīng)用。它利用分析物在不同填料中被吸附的能力差將目標(biāo)物提純,有效地將目標(biāo)物與干擾物分離,大大增強(qiáng)對(duì)分析物,特別是痕量分析物的檢出能力,提高了被測(cè)樣品的回收率。

 

     萬(wàn)千世界的奇妙,造就了樣品基質(zhì)的千差萬(wàn)別,蔬菜,水果,肉蛋奶,水,土壤, 橡膠,紡織品等等,不管是食品還是環(huán)境的樣品,復(fù)雜程度也是各不相同。復(fù)雜程度一般的樣品可以用簡(jiǎn)單提取作為前處理方法,但是對(duì)于特別復(fù)雜的樣品就需要經(jīng)過(guò)特殊的前處理,比如用SPE 小柱,做進(jìn)一步的凈化,把目標(biāo)物和雜質(zhì)分離,進(jìn)而在色譜儀器上得到一個(gè)漂亮色譜圖,大家看現(xiàn)行的一些標(biāo)準(zhǔn)就會(huì)發(fā)現(xiàn),有些樣品基質(zhì)的前處理肯定是會(huì)用到 SPE 手段的。

QQ圖片20200812090350.png

 

     在用到 SPE 前處理的時(shí)候,各位分析檢測(cè)工程師碰到煩人令人抓狂的問(wèn)題是不是流速慢、流速不均、堵、下不去的情況;過(guò)小柱過(guò)到令人崩潰,既然流速都保證不了,怎么敢奢求回收率。

 

     沒(méi)關(guān)系,安譜實(shí)驗(yàn)憑借多年來(lái)在樣品前處理領(lǐng)域的深厚積累,教您幾招,治liao小柱“便秘”的難題。

QQ圖片20200812090410.png

 

 

     SPE 的基本操作,包括活化、平衡、上樣、淋洗、洗脫,五個(gè)步驟。問(wèn)題無(wú)外乎出現(xiàn)在這幾個(gè)步驟里面,別急,我們一個(gè)個(gè)過(guò)來(lái)看。

 

活化平衡

     一般反相或者離子交換類(lèi)型的小柱分別用到甲醇和水進(jìn)行活化和平衡,正相小柱會(huì)用到石油醚或者正己烷來(lái)活化平衡。

 

1) 填料裝填過(guò)緊導(dǎo)致流速過(guò)慢。 可以通過(guò)加壓加快流速,或者購(gòu)買(mǎi)對(duì)流速有嚴(yán)格質(zhì)控廠(chǎng)家的產(chǎn)品解決,安譜實(shí)驗(yàn)對(duì) CNW 小柱每個(gè)批次的流速都有嚴(yán)格的質(zhì)控范圍,質(zhì)控范圍之外的小柱會(huì)被剔除。

 

2) 填料粒徑過(guò)小導(dǎo)致流速變慢。 比如同樣的活化溶劑下,100-200 目的 florisil 就會(huì)比60-100 目的更慢些。 可以根據(jù)樣品基質(zhì)類(lèi)型和使用習(xí)慣選擇合適規(guī)格的小柱。

 

3) 柱管體積差異。 500mg 3mL; 500mg 6mL, 這兩種規(guī)格形成的填料高度不一樣,顯然 500mg 6mL,直徑大,填料高度低,流速相對(duì)就快,就像地鐵站早高峰,閘口多,通過(guò)速率快,閘口少,自然就擁堵,通過(guò)速率慢??筛鶕?jù)樣品基質(zhì)類(lèi)型和使用習(xí)慣選擇合適柱管的小柱。

 

4) 溶劑順序加錯(cuò)。對(duì)于反相類(lèi)型小柱,如果不小心把水當(dāng)成活化溶劑,就會(huì)出現(xiàn)流速很慢的問(wèn)題,因?yàn)?strong>水對(duì)于疏水性反相填料的浸潤(rùn)性是很差的,所以不小心把水當(dāng)成甲醇來(lái)活化,可能等到花兒都謝了,它還是流不下來(lái),注意別加錯(cuò)哦。

 

5) 活化和平衡溶劑不互溶。比如二氯甲烷活化,水平衡小柱,大家就會(huì)發(fā)現(xiàn),水加入后,流速也會(huì)慢到讓你崩潰。 這是因?yàn)樗投燃淄榈幕ト苄圆钤斐傻?/span>可以加入過(guò)渡溶劑甲醇來(lái)解決,甲醇既可以與二氯甲烷互溶也可以和水互溶。

 

6) 空氣進(jìn)入填料。這個(gè)原因比較常見(jiàn)但也是比較難發(fā)現(xiàn)的原因, SPE 小柱是由篩板,填料,柱管組成,不是有機(jī)的整體,所以在運(yùn)輸尤其是長(zhǎng)途運(yùn)輸?shù)倪^(guò)程中,就會(huì)出現(xiàn)微小的松動(dòng),導(dǎo)致空氣進(jìn)入填料,一般不容易被肉眼所發(fā)現(xiàn)。含有空氣的填料在氣壓的作用下導(dǎo)致活化溶劑流下速度很慢。說(shuō)到這大家可能就容易理解為什么同一批次的小柱,會(huì)出現(xiàn)輕微的流速參差不齊的情況,可以用 SPE 裝置加正壓的方式抽掉空氣后,再一起加溶劑。

 

上樣

     由于樣品基質(zhì)的復(fù)雜性,篩板孔徑在 20um,在上樣之前需要把顆粒物給過(guò)濾掉,比如含蛋白的樣品需要加酸、鹽、有機(jī)溶劑、加熱等方式將蛋白處理掉;對(duì)于一般的基質(zhì),應(yīng)采用過(guò)濾,離心或者高速離心,換大孔徑填料等方式進(jìn)行處理,現(xiàn)在好多第三方檢測(cè)單位樣品量非常多,但是該做的前處理步驟不能省,否則對(duì)儀器的損壞,對(duì)數(shù)據(jù)的可靠性都會(huì)有一定的影響。

 

淋洗和洗脫

      一般在淋洗和洗脫這兩步出現(xiàn)流速慢的情形比較少,因?yàn)榱芟春拖疵摱际遣粠Щ|(zhì)的純?nèi)軇?,一般上樣步驟沒(méi)有堵塞,就不會(huì)影響到淋洗和洗脫??赡艹霈F(xiàn)流速慢的地方在于淋洗完小柱并干燥之后,因?yàn)橐坏└稍镄≈?,就?huì)使空氣進(jìn)入填料,這就回到了活化平衡導(dǎo)致流速慢的第 6 個(gè)原因,只要稍微加壓就可以解決問(wèn)題了。

 

     當(dāng)然我們?cè)谧鰧?shí)驗(yàn)的時(shí)候,不是每個(gè)步驟都要求快,魯迅說(shuō)過(guò):欲速則不達(dá),所以在小柱操作技巧里面,有兩個(gè)步驟是需要控制流速的, 分別是上樣和洗脫;這兩個(gè)過(guò)程是目標(biāo)物與柱填料通過(guò)分子間作用力進(jìn)行吸附和解吸附的過(guò)程,需要時(shí)間慢慢作用,大家一定要注意呦!

 

 

這一次干貨時(shí)間就為大家分享到這里,

下次再見(jiàn)!

 

 

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