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延長色譜柱使用壽命的方法

時間:2009/3/16閱讀:4421
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      色譜柱的使用壽命,除了與所分析的樣品和流動相及使用頻率有關(guān)系外,zui主要的是與日常的委會密切相關(guān)。為延長色譜柱的使用壽命,維護(hù)您的利益,請仔細(xì)閱讀此部分。
色譜柱的使用壽命主要是分局柱效和柱壓兩個指標(biāo)來衡量,如果一支色譜柱柱效太低或柱壓太高,通常被認(rèn)為該色譜柱已經(jīng)結(jié)束。因此,延長色譜柱使用壽命的關(guān)鍵是,消除引起柱效下降和柱壓升高的因素。以下是色譜柱的日常維護(hù)方法:
一、流動相的PH應(yīng)在使用的范圍內(nèi)
    Welch公司的色譜柱除反相氰基柱PH1.5-9.0外,其反相色譜柱的PH范圍均為1.5-10,由于填料中存在Si-C和Si-O鍵,流動相超過其PH范圍將會導(dǎo)致硅膠基質(zhì)流失和鍵合相碳鏈斷裂,使柱效下降,使用壽命變短。由于流動相的PH 控制不當(dāng)而對色譜柱造成的損害,通常很難是色譜柱恢復(fù),因此必須認(rèn)真對待,嚴(yán)格控制流動相的PH值。
二、去除樣品和流動相中的固體顆粒
    樣品和流動相中含有的固體顆粒物質(zhì)會堵塞色譜柱篩板,篩板被堵住不僅會引起柱壓的升高,而且也會引起柱效下降,因為篩板的堵塞會引起液流不均,導(dǎo)致色譜峰型拖尾、變寬,從而使柱效下降。因此,建議使用超純水和色譜純試劑,在分析樣品前對樣品進(jìn)行針筒過濾,流動相過0.45μm濾膜。
三、使用保護(hù)柱或在線過濾器
    樣品和流動相經(jīng)過濾后并不能*消除固體顆粒物質(zhì),因為泵的磨損、密封圈和管路的老化也會產(chǎn)生固體顆粒物質(zhì),這些固體顆粒被流動相帶入色譜柱,堵塞篩板,導(dǎo)致柱壓升高、柱效下降。保護(hù)柱和在線過濾器上都有篩板,其孔徑與色譜柱孔徑相同,因此可以阻止固體顆粒物質(zhì)到達(dá)色譜柱,有效防止色譜柱篩板的堵塞。由于柱壓升高在分析故障中占很大 比例,因此,除對樣品和流動相進(jìn)行過濾外,建議您在色譜柱進(jìn)樣端加上保護(hù)柱或在線過濾器。
    如果去人色譜柱柱壓升高是由于進(jìn)樣端篩板被堵引起的,科選擇一下方式進(jìn)行補(bǔ)救:
    1、先在色譜柱前加上保護(hù)柱或在線過濾器,然后用甲醇、水=20/80ml/min反向沖色譜柱180min。
    2、先在色譜柱進(jìn)樣端加上保護(hù)柱或在線過濾器,然后反向使用。
四、正確使用緩沖鹽
    緩沖鹽通常易溶于水,難溶于有機(jī)溶劑,因此緩沖鹽使用不當(dāng)會使其析出,堵塞填料基質(zhì)上的微孔和顆粒間的空隙,使填料板結(jié),柱壓上升;同時阻礙了基質(zhì)上鍵合的碳鏈自由舒展,使色譜柱的保留能力下降,柱效降低。緩沖鹽析出后,去除非常困難,因此,正確的使用緩沖鹽對延長色譜柱使用壽命非常重要。
    正確使用緩沖鹽的目的是防止緩沖鹽析出,因此正確使用緩沖鹽的方法可歸結(jié)為一句話:使用前要過濾,使用后要沖洗。具體方法如下:
   1、等度條件:使用緩沖鹽前和使用后需用過渡流動相以1.0ml/min流速沖洗60min;使用后去除緩沖鹽的另一個方法是用過渡流動相以0.2ml/min流速沖洗色譜柱過夜。
   2、梯度條件:用含有緩沖鹽的流動相跑梯度之前,用與初始流動相組成相同的過渡流動相以1.0ml/min流速沖洗60min,再用該過渡流動相以1.0ml/min沖洗色譜柱120min。含緩沖鹽流動相的梯度設(shè)定應(yīng)盡量平緩,以避免梯度過程中緩沖鹽析出。
   注意:過渡流動相是指有機(jī)相和水相的組成與分析流動相相同,區(qū)別只是過渡流動相不含緩沖鹽。
   3、緩沖鹽析出的補(bǔ)救方法:
   1)方案1:用甲醇/20/80以1.0ml/min流速35攝氏度條件下反向沖洗色譜柱120min
   2)方案2:用甲醇/水=20/80以0.2ml/min流速反向沖洗色譜柱過夜。
五、防止強(qiáng)保留物質(zhì)在色譜柱上存留
    強(qiáng)保留物質(zhì)和大分子化合物在色譜柱中累積,對樣品中的化合物產(chǎn)生額外的保留行為,不僅引起峰型變寬、拖尾,使柱效下降,同時也會引起保留時間的變化,累積到一定程度時還會導(dǎo)致柱壓升高。由于強(qiáng)保留物質(zhì)和大分子化合物對色譜分離的影響是一個累積效應(yīng),需要一定的時間才會體現(xiàn)出來,但對許多藥品特別是復(fù)雜樣品而言,很難判斷其是否是含有強(qiáng)保留物質(zhì),因此要防止強(qiáng)保留物質(zhì)的累積,需要在每天的日常維護(hù)中用純甲醇或乙氰清洗色譜柱。
清洗方法:
   1、未使用緩沖鹽:每天分析完成后,先用上述方法除去緩沖鹽,然后再用甲醇或乙氰反向沖洗色譜柱60min。
   2、使用過緩沖鹽:分析完成后,先用上述方法除去緩沖鹽,然后在用純甲醇或乙氰反向沖洗色譜柱60min
   3、補(bǔ)救方法:
水——乙氰——氯仿(或異丙醇)——乙氰——水
每一步以1.0ml/min流速反向沖洗色譜柱60min。 

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