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產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

本試劑盒適用于檢測(cè)牛血樣、拭子、精液、動(dòng)物組織（粘膜、肝、脾、腎、淋巴結(jié)、胎盤組織等）等樣品   中牛皰疹病毒 4 型病毒感染，用于牛皰疹病毒 4 型感染的輔助診斷。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

一、嚴(yán)格的質(zhì)控體系

所有試劑盒從原料到成品都經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的質(zhì)量控制，確保每一盒試劑盒都具有穩(wěn)定可靠的質(zhì)量，讓您的檢測(cè)結(jié)果更可信。

二、高靈敏度

產(chǎn)品經(jīng)過(guò)不斷優(yōu)化，具有出色的靈敏度，能夠檢測(cè)到極微量的牛皰疹病毒4型核酸，不放過(guò)任何潛在的感染風(fēng)險(xiǎn)。

三、便捷操作

綜合各項(xiàng)指標(biāo)特性，研發(fā)出操作便捷的試劑盒。從樣本制備到結(jié)果分析，每一步都有清晰的操作指南，即使是新手也能輕松上手。

四、多樣的檢測(cè)驗(yàn)證樣本

該試劑盒經(jīng)過(guò)多種樣本的檢測(cè)驗(yàn)證，適用于牛血樣、拭子、精液、動(dòng)物組織（粘膜、肝、脾、腎、淋巴結(jié)、胎盤組織等）等多種常見(jiàn)樣本，滿足不同的檢測(cè)需求。

五、個(gè)性化定制服務(wù)

專業(yè)的研發(fā)團(tuán)隊(duì)可為您提供個(gè)性化的定制服務(wù)，根據(jù)您的特殊需求進(jìn)行產(chǎn)品優(yōu)化和調(diào)整，為您提供更貼合實(shí)際的檢測(cè)方案。

六、豐富的產(chǎn)品線

除了牛皰疹病毒4型(BoHV-4)熒光PCR檢測(cè)試劑盒，我們還提供Elisa試劑盒以及其它快檢試劑盒，滿足您在不同領(lǐng)域的檢測(cè)需求。

七、完善的售前售后服務(wù)

我們擁有完善專業(yè)的售前售后服務(wù)團(tuán)隊(duì)，在您購(gòu)買前為您提供詳細(xì)的產(chǎn)品咨詢和技術(shù)支持，購(gòu)買后為您解決使用過(guò)程中遇到的任何問(wèn)題，讓您無(wú)后顧之憂。

產(chǎn)品參數(shù)：

產(chǎn)品規(guī)格

50T/盒，可滿足一定規(guī)模的檢測(cè)需求。

檢測(cè)方法

實(shí)時(shí)熒光PCR，具有快速、準(zhǔn)確、靈敏等優(yōu)點(diǎn)。

適用儀器

ABI7500、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測(cè)儀。

標(biāo)本采集

采集牛血樣、拭子、精液、動(dòng)物組織(粘膜、肝、脾、腎、淋巴結(jié)、胎盤組織等)等樣品。

保存和運(yùn)輸

采集或處理好的樣品在 2℃~8℃條件下保存應(yīng)不超過(guò) 24 h；若需長(zhǎng)期保存，應(yīng)放置-70℃以下保存，凍融不超過(guò) 3 次。

使用方法：

1.樣品處理（樣本處理區(qū)）

1.1樣本前處理

血清、全血：用無(wú)菌-注射器或采血專用真空管針無(wú)菌自牛靜脈采血，無(wú)菌分離血清，直接用于核酸提取。 用無(wú)菌-注射器或采血專用真空管針無(wú)菌自牛靜脈采血，將血液直接滴入抗凝劑中，并立即連續(xù)搖動(dòng)，充分混合。    抗凝劑采用檸檬酸鈉緩沖液，或 0.5mol/L EDTA。每 6mL 血液加 1mL 抗凝劑。直接用于核酸提取。

拭子：用無(wú)菌棉拭子采集鼻道、生殖器官和眼分泌物，采集時(shí)，將拭子反復(fù)刮擦呼吸道或生殖器官粘膜，   蘸取分泌物后，立即將棉拭子浸入 1mL~2mL 滅菌 0.01mol/L pH7.2 的 PBS 中，4℃儲(chǔ)存，盡快送達(dá)實(shí)驗(yàn)室。取樣進(jìn)行檢驗(yàn)時(shí)，充分振動(dòng)、擠干拭子，浸泡液采用 4 000 r/min 離心 1 min，取上清備用。

精液：將冷凍精液樣品或新鮮精液樣品分裝到 1.5mL 微量離心管中，充分解凍后，振蕩混勻，采用 12 000 r/min

離心 30 s，取上清按 GB/T 27981-2011 中 6.2.1 或 6.2.3 進(jìn)行核酸提??；或取原液按 6.2.2 或 6.2.3 提取核酸。每

一批次冷凍精液取 3 支凍精管，分別進(jìn)行核酸提取和后續(xù)檢測(cè)。

組織樣品：剖檢時(shí)無(wú)菌采集動(dòng)物呼吸道粘膜、扁桃腺、肺部和支氣管淋巴結(jié)，對(duì)流產(chǎn)胎兒，采集剛死亡胎兒肝、肺、腎、脾和胎盤組織。檢測(cè)時(shí)，用無(wú)菌剪、鑷取適量樣品，按 1：5 的比例加入滅菌 0.01 mol/L pH7.2 的 PBS（例：1g 組織樣品加 5mL 溶液），在研缽中剪碎，充分研磨，取研磨物分裝到離心管中，凍融 2 次~3 次， 4 000r/min 離心 5 min，取上清備用[1]。

1.2核酸提取

推薦采用上海烜雅生物科技有限公司生產(chǎn)的核酸-提取或純化試劑（磁珠法或離心柱法）進(jìn)行核酸提取，   請(qǐng)按照試劑說(shuō)明書進(jìn)行操作。

2.試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）

根據(jù)待檢測(cè)樣本總數(shù)，設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對(duì)照+1 管陽(yáng)性對(duì)照；樣品每滿

10 份，多配制 1 份)，每測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：

試劑BoHV-4 反應(yīng)液酶液

用量19μL1μL

將混合好的測(cè)試反應(yīng)液分裝到 PCR 反應(yīng)管中，20μL/管。

3.加樣（樣本處理區(qū)）

將步驟 1 提取的核酸、陽(yáng)性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 5μL，分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中，蓋好管蓋，混勻， 短暫離心。

4.PCR 擴(kuò)增（核酸擴(kuò)增區(qū)）

4.1將待檢測(cè)反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi)；

4.2設(shè)置好通道、樣品信息，反應(yīng)體系設(shè)置為 25μL；

熒光通道選擇： 檢測(cè)通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，ABI 系列儀器請(qǐng)勿選擇

ROX 參比熒光，選擇 None 即可。

4.3推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：

步驟循環(huán)數(shù)溫度時(shí)間收集熒光信號(hào)

11 cycle95℃2min否

245 cycles95℃15sec否

60℃30sec是

5.結(jié)果分析判定

5.1結(jié)果分析條件設(shè)定（請(qǐng)參照各儀器使用說(shuō)明書進(jìn)行設(shè)置，以分析 ABI7500 儀器為例）

反應(yīng)結(jié)束后自動(dòng)保存結(jié)果，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 Start 值、End 值以及 Threshold 值（用戶可根據(jù)實(shí)際情況自行調(diào)整，Start 值可設(shè)在 3～15、End 值可設(shè)在 5～20，使閾值線位于擴(kuò)增曲線指數(shù)期，陰性質(zhì)控品的擴(kuò)增曲線平直或低于閾值線），點(diǎn)擊 Analyze 自動(dòng)獲得分析結(jié)果。

5.2結(jié)果判斷

陽(yáng)性：檢測(cè)通道 Ct 值≤40，且曲線有明顯的指數(shù)增長(zhǎng)曲線； 陰性：樣本檢測(cè)結(jié)果無(wú) Ct 值，且無(wú)特異性擴(kuò)增曲線；

可疑：樣本檢測(cè)結(jié)果 40＜Ct 值≤45，建議重復(fù)檢測(cè)，如果檢測(cè)通道仍為 40<Ct 值≤45，且曲線有明顯的增長(zhǎng)曲線，判定為陽(yáng)性，否則為陰性。

5.3質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

陰性質(zhì)控品：無(wú)特異性擴(kuò)增曲線或無(wú) Ct 值顯示；

陽(yáng)性質(zhì)控品：擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)增長(zhǎng)期，且 Ct 值≤32； 以上條件應(yīng)同時(shí)滿足，否則實(shí)驗(yàn)視為無(wú)效。

6.檢測(cè)方法的局限性

1.樣本檢測(cè)結(jié)果與樣本收集、處理、運(yùn)送以及保存質(zhì)量有關(guān)；

2.樣本提取過(guò)程中沒(méi)有控制好交叉污染，會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果；

3.陽(yáng)性對(duì)照、擴(kuò)增產(chǎn)物泄漏，會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果；

4.病原體在流行過(guò)程中基因突變、重組，會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果；

5.不同的提取方法存在提取效率差異，會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果；

6.試劑運(yùn)輸，保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測(cè)效能下降，出現(xiàn)假陰性或定量檢測(cè)不準(zhǔn)確的結(jié)果；

7.本檢測(cè)結(jié)果僅供參考，如須確診請(qǐng)結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測(cè)手段。

注意事項(xiàng)：

1.所有操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行；

2.試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化，完-全混勻并短暫離心；

3.反應(yīng)液應(yīng)避光保存；

4.反應(yīng)中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊；

5.使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服；

6.樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行，以免交叉污染；

7.實(shí)驗(yàn)完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺(tái)和移液器；

8.試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待，并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。

9.本產(chǎn)品僅供科研。

選擇我們的牛皰疹病毒4型(BoHV-4)熒光PCR檢測(cè)試劑盒，就是選擇精準(zhǔn)、高效、可靠的檢測(cè)方案，為您的科研實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航！