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高電場強度電泳時，除了降低核酸樣品的熱效應(yīng)，還需要注意哪些問題？

2025-4-24　　閱讀(154)

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高電場強度電泳時，除了降低核酸樣品的熱效應(yīng)，還需要注意以下問題：

  • 防止凝膠破裂：高電場強度下，凝膠內(nèi)部會產(chǎn)生較大的應(yīng)力，容易導(dǎo)致凝膠破裂。因此，要確保凝膠的制備質(zhì)量，凝膠濃度均勻、凝固充分；同時，在電泳過程中要避免電泳槽受到震動或碰撞。

  • 避免電極腐蝕：高電場強度可能會加速電極的腐蝕，尤其是在長時間電泳或使用高離子強度緩沖液時。應(yīng)選擇質(zhì)量好、耐腐蝕的電極，如鉑電極；定期檢查電極的狀況，如有腐蝕及時更換；并且在電泳結(jié)束后，及時清洗電極，去除表面的電解質(zhì)和雜質(zhì)。

  • 注意安全：高電場強度電泳使用的電壓較高，存在觸電風(fēng)險。操作時要確保電泳設(shè)備接地良好，使用絕緣手套和護目鏡等防護裝備；在電泳過程中，不要觸摸電泳槽和電極，避免發(fā)生觸電事故。

  • 考慮核酸分子的構(gòu)象變化：高電場強度可能會使核酸分子的構(gòu)象發(fā)生變化，從而影響其遷移行為。對于一些特殊結(jié)構(gòu)的核酸分子，如超螺旋 DNA 或具有復(fù)雜二級結(jié)構(gòu)的 RNA，可能需要在緩沖液中加入適量的輔助試劑，如尿素、甲酰胺等，以幫助維持核酸分子的天然構(gòu)象，保證電泳結(jié)果的準確性。

  • 防止樣品擴散：高電場強度下，樣品在凝膠中的擴散速度可能會加快，導(dǎo)致條帶變寬，分辨率下降。可通過在樣品中加入適量的蔗糖或甘油等密度試劑，增加樣品的密度，減少擴散；同時，盡量縮短電泳時間，也有助于降低樣品的擴散程度。

  • 準確選擇 Marker：由于高電場強度下核酸分子的遷移速度可能與常規(guī)條件不同，需要選擇合適的分子量 Marker 作為參照。最好選擇在高電場強度下遷移行為穩(wěn)定、條帶清晰的 Marker，以便準確判斷核酸分子的大小和遷移情況。

  • 確保設(shè)備穩(wěn)定：電泳設(shè)備的穩(wěn)定性對高電場強度電泳至關(guān)重要。使用前要檢查設(shè)備的電源、電極連接等是否正常，避免在電泳過程中出現(xiàn)電壓波動或設(shè)備故障，影響實驗結(jié)果。

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