選擇適合核酸電泳的凝膠濃度，需要綜合考慮核酸分子的大小、電泳目的以及實(shí)驗(yàn)要求等因素，以下是一些參考原則：
核酸分子大小
大分子核酸：對(duì)于分子量較大的核酸，如大于 20kb 的 DNA 片段，通常選擇較低濃度的瓊脂糖凝膠，如 0.3% - 0.8%。低濃度凝膠的孔徑較大，有利于大分子核酸在電場中遷移，使其能夠更好地分離。
中等大小核酸：對(duì)于分子量在 1 - 20kb 之間的 DNA 或 RNA，常用 1% - 1.5% 的瓊脂糖凝膠。這種濃度的凝膠孔徑適中，能對(duì)中等大小的核酸片段進(jìn)行有效分離，條帶清晰度較高。
小分子核酸：當(dāng)分離小于 1kb 的 DNA 片段或 RNA 時(shí)，可選用 1.5% - 3% 的瓊脂糖凝膠，或者使用聚丙烯酰胺凝膠。聚丙烯酰胺凝膠的孔徑更小，分辨率更高，適合分離較小的核酸分子，能將相差幾個(gè)堿基的核酸片段區(qū)分開來。
電泳目的
分離鑒定：如果是為了分離和鑒定核酸樣品中的不同片段，需要根據(jù)核酸片段的大小范圍選擇能使各片段有效分離的凝膠濃度，以獲得清晰的條帶，便于觀察和分析。
回收核酸：若目的是從凝膠中回收特定的核酸片段，應(yīng)選擇能使目的片段與其他雜質(zhì)片段分離效果佳的凝膠濃度，同時(shí)要考慮凝膠的強(qiáng)度和韌性，以便于后續(xù)的切膠回收操作。一般來說，濃度適中的凝膠（如 1% - 1.5% 瓊脂糖凝膠）在回收較大片段時(shí)較為常用，而對(duì)于較小片段，可能需要更高濃度的凝膠或聚丙烯酰胺凝膠。
實(shí)驗(yàn)要求
分辨率要求：如果實(shí)驗(yàn)對(duì)核酸分離的分辨率要求較高，如需要區(qū)分長度相近的核酸片段，應(yīng)選擇能夠提供更高分辨率的凝膠濃度和類型。例如，在進(jìn)行基因分型或突變檢測時(shí)，通常會(huì)使用聚丙烯酰胺凝膠或高濃度的瓊脂糖凝膠。
電泳時(shí)間和效率：較低濃度的凝膠電泳時(shí)核酸遷移速度較快，所需時(shí)間較短，但分辨率可能較低；高濃度凝膠則相反，電泳時(shí)間較長，但分辨率較高。在實(shí)際操作中，需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)的時(shí)間限制和對(duì)結(jié)果的要求來平衡選擇。
此外，不同廠家生產(chǎn)的凝膠試劑可能在性能上略有差異，因此在進(jìn)行重要實(shí)驗(yàn)時(shí)，可先進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，以確定適合的凝膠濃度。同時(shí)，還可以參考相關(guān)的文獻(xiàn)資料或?qū)嶒?yàn)經(jīng)驗(yàn)，選擇已被廣泛驗(yàn)證的凝膠濃度條件
中級(jí)會(huì)員·2年
