細(xì)胞殘留人白介素15(IL-15) ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

貨號(hào)： HG-IL015

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

BlueKit@系列細(xì)胞殘留人白介素 15(IL-15) ELISA 檢測(cè)試劑盒采用雙抗夾心法，用于定量檢測(cè)血清、血漿或細(xì)胞上清中人1-15 蛋白的含量。將特異性抗人兒-15 單克隆抗體包被在微孔板上，反應(yīng)孔內(nèi)加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣本、檢測(cè)抗體，室溫(18~25°C)孵育，洗滌后再加入酶結(jié)合物(Streptavidin-HRP)孵育。洗滌后加入顯色液TMB。顏色反應(yīng)的深淺與目標(biāo)蛋白濃度成正比。

檢測(cè)范圍:3.91-250pg/mL

靈 敏 度:0.24 pg/mL

精密度:CV%≤10%，RE%≤士15%

規(guī)格：

96T

應(yīng)用：

適用于血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清及其他生物學(xué)樣本中人兒-15 蛋白含量測(cè)定。

試劑盒組成：

備 注:所有組分存儲(chǔ)溫度均為 2~8℃，有效期12個(gè)月。

需自行準(zhǔn)備的材料

◆酶標(biāo)儀

◆去離子水或蒸餾水

◆恒溫培養(yǎng)箱    

◆全新濾紙

◆微量移液器及吸頭

◆渦旋振蕩器

試劑配制

1x洗液根據(jù)實(shí)際用量，取適量10x濃縮洗液用去離子水 10 倍稀釋)

標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

人IL-7標(biāo)準(zhǔn)品S5000 pg/mL40uL+360LSD 作為高標(biāo)準(zhǔn)(500pg/mL)。每個(gè)稀釋試管中加入200μLSD，使用高標(biāo)準(zhǔn)制備 1:1稀釋系列。在進(jìn)行下一步轉(zhuǎn)移之前徹i底混合每個(gè)試管。SD 用作零標(biāo)準(zhǔn)(0pg/mL)。

操作步驟

檢測(cè)之前請(qǐng)將所有的試劑、樣本恢復(fù)至室溫(18~25°C)。

1.準(zhǔn)備好所有需要的試劑及工作濃度標(biāo)準(zhǔn)品。

2.將不需要的板條拆卸下來(lái)，放回鋁箔袋，重新封好封口。

3.每孔加入 50uL檢測(cè)緩沖液(AB)。

4.加入 50uL 的標(biāo)準(zhǔn)品(S)、樣本。保證連續(xù)加樣，請(qǐng)不要間斷。加樣過(guò)程在 15 分鐘內(nèi)完成。

5.每孔加入50uL檢測(cè)抗體(DA)。

6.使用封板膜封板。500 轉(zhuǎn)/分鐘振蕩，室溫(18~25°C)孵育1個(gè)小時(shí)。

7.棄掉孔內(nèi)液體，每孔加入 300uL洗液洗板，洗滌4次。每次洗板，在吸水紙上拍干。為獲得理想的實(shí)驗(yàn)性能，必須徹i底移除殘留液體。

8.加入 100uL 酶結(jié)合物(SH)。

9.使用新的封板膜封板。500 轉(zhuǎn)/分鐘振蕩，室溫(18~25°C)(18-25°C)孵育 30 分鐘。

10.重復(fù)步驟 7。

11.每孔加入 100μL 顯色液，避光室溫(18~25°C)孵育 10-15 分鐘。

12.每孔加入 100μL 終止液。

13.在 30 分鐘之內(nèi)，酶標(biāo)板 450nm 波長(zhǎng)測(cè)定 OD 值，校正波長(zhǎng)設(shè)定為 570nm 或者 630nm。

結(jié)果處理

1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線OD處理（見(jiàn)下例，僅為示例，具體以實(shí)際測(cè)定為準(zhǔn)）

2. 以標(biāo)準(zhǔn)品理論濃度與對(duì)應(yīng)OD值取1og后進(jìn)行直線擬合，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線（如下圖所示）

注意事項(xiàng)

1. 樣品首i次檢測(cè)，建議進(jìn)行至少3個(gè)連續(xù)倍數(shù)的稀釋，以在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)產(chǎn)生至少一個(gè)稀釋后樣品。
2. 試劑按標(biāo)簽說(shuō)明儲(chǔ)存，使用前室溫（18-25℃）平衡。
3. 包被酶標(biāo)板使用前，請(qǐng)平衡至室溫（18-25℃）再打開(kāi)外包裝袋，實(shí)驗(yàn)中不用的板條立即放回包裝中密封，4℃可保存一個(gè)月。其余不用試劑應(yīng)包裝好或蓋好。
4. 實(shí)驗(yàn)操作中請(qǐng)使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
5. 使用前檢查試劑盒內(nèi)各種試劑。試劑稀釋、加樣和終止反應(yīng)應(yīng)充分混勻或搖勻?qū)?shí)驗(yàn)結(jié)果尤為重要。
6. 洗滌過(guò)程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在潔凈的紙巾上充分拍干，直至看不到水印。勿將紙巾直接放入反應(yīng)孔中吸水。
7. 底物顯色液對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下，避免與金屬接觸影響結(jié)果。
8. 本產(chǎn)品為一次性使用的試劑盒，請(qǐng)?jiān)谛趦?nèi)使用。

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