慶大-霉素殘留 ELISA  檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書

貨號(hào)：HG-GE001

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法測(cè)定樣品中慶大-霉素的微量殘留。包被酶標(biāo)板中預(yù)包被偶聯(lián)抗原，樣本中殘留的慶大-霉素和酶標(biāo)板上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗慶大-霉素抗體，加入酶標(biāo)二抗，之后通過加入 TMB底物顯色，使用酶標(biāo)儀在 450nm/630nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），吸光度與樣品中慶大-霉素的含量成負(fù)相關(guān)。

檢測(cè)范圍: 0.1~10 ng/mL

定量限:0.1ng/mL
檢 測(cè) 限:<0.1ng/mL
準(zhǔn)確度:70%~130%

規(guī)格：

96T

應(yīng)用：

適用于生物制品純化工藝過程的優(yōu)化、中間工藝過程的雜質(zhì)控制以及終產(chǎn)品的放行檢測(cè)。

試劑盒組成：

備 注:未開封試劑盒應(yīng)在 2~8℃條件下避光保存，有效期為 12 個(gè)月。開封后未使用完的試劑盒注意仍在 2-8℃條件下避光保存。

需自行準(zhǔn)備的材料

◆酶標(biāo)儀

◆去離子水

◆恒溫培養(yǎng)箱

◆全新濾紙

◆微量移液器及吸頭

◆渦旋振蕩器

實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

1.所有試劑以及待測(cè)樣本需要恢復(fù)室溫。所有試劑現(xiàn)配現(xiàn)用。

2.1x洗液配制：濃縮洗液平衡至室溫，不要有結(jié)晶?；?/span>勻后根據(jù)用量，取適量用超純水按1：19的比例，將10x洗液稀釋20倍，最終得到1x洗液。

3.顯色液配制:將顯色液 A、顯色液B等體積混合，混勻后避光放置。(注意:時(shí)間不能放置太久，一般使用前的10min 配制，如混合后的顯色液已經(jīng)變藍(lán)，請(qǐng)勿使用)。

4.標(biāo)準(zhǔn)品的配制:

用樣品稀釋液將標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至 10ng/mL，然后用 2.5 倍倍比稀釋的方法配制標(biāo)準(zhǔn)品(每次實(shí)驗(yàn)使用新配制的標(biāo)準(zhǔn)溶液)，如下圖:

操作步驟

使用前所有試劑組分以及待測(cè)樣本需要恢復(fù)室溫。建議所有的標(biāo)準(zhǔn)品和待檢樣本進(jìn)行雙復(fù)孔測(cè)定。

1.試劑準(zhǔn)備:提前準(zhǔn)備好各種待測(cè)試劑、稀釋好的標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣本。

2.酶標(biāo)板條確定:計(jì)算待測(cè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品所需酶標(biāo)板條，將酶標(biāo)條從鋁箔袋取出，剩余的酶標(biāo)條放回鋁箔袋中并封好袋低溫保存。

3.樣本孵育:每孔中加入 50uL 標(biāo)準(zhǔn)品/空白(樣品稀釋液)/樣品，之后再加入 50μL 檢測(cè)抗體，用封板膜封板，然后置于37°C避光靜置溫育 30min。

4.洗板:棄去孔中液體，加入1x洗液(250uL/孔)洗板3次，拍干酶標(biāo)板中殘留液體。

5.酶結(jié)合物孵育:將酶結(jié)合物加入酶標(biāo)板中，100 uL/孔，37℃℃靜置孵育 30 min。

6.洗板:同步驟 4。

7.顯色:將預(yù)先配置好的顯色液按 100uL/孔加入酶標(biāo)板中，用封板膜封板，37℃避光靜置溫育 15min。

8.終止:加入 100 μL/孔終止液至酶標(biāo)板中，輕輕震動(dòng)酶標(biāo)板至顯色均勻。

9.讀值:20 min 內(nèi)讀取 450nm/630nm 波長(zhǎng)處的吸光度值。450nm 作為檢測(cè)波長(zhǎng)，630nm 作為參比波長(zhǎng)。

結(jié)果處理

1.吸光度值的計(jì)算

每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品或樣品的吸光度值為 OD450nm-0D630nm。

2.百分吸光度的計(jì)算

每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的平均吸光度值(雙孔)除以 0ng/mL標(biāo)準(zhǔn)品的平均吸光度值再乘以 100%，即為百分吸光度:

百分吸光度(%)=B/B0x100%

B:標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的平均吸光度值
B0:0ng/mL標(biāo)準(zhǔn)品的平均吸光度值

3.標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算

以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光度值為縱坐標(biāo)Y，標(biāo)準(zhǔn)品濃度值為橫坐標(biāo)X，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，推薦使用四參數(shù) Logistic數(shù)學(xué)模型擬合方程:
Y=((A-D)/(1+(X/C)^B))+D

將樣本的百分吸光度值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度值，乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中慶大-霉素的實(shí)際濃度。

(以上標(biāo)準(zhǔn)曲線圖僅供參考，應(yīng)以同次實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)品所繪標(biāo)準(zhǔn)曲線為準(zhǔn))

注意事項(xiàng)

1.樣品首i次檢測(cè)，建議進(jìn)行至少3個(gè)連續(xù)倍數(shù)的稀釋，以在標(biāo)曲范圍內(nèi)產(chǎn)生至少一個(gè)稀釋后樣品。

2.試劑按標(biāo)簽說(shuō)明儲(chǔ)存，使用前室溫平衡。

3.包被酶標(biāo)板使用前請(qǐng)平衡至室溫再打開外包裝袋，實(shí)驗(yàn)中不用的板條立即放回包裝中密封，4℃可保存一個(gè)月。其他不用的試劑應(yīng)包裝好或蓋好。

4.實(shí)驗(yàn)操作中請(qǐng)使用一次性的吸頭，避免交叉污染。

5.使用前檢查試劑盒內(nèi)各種試劑。試劑的稀釋、加樣和終止反應(yīng)應(yīng)充分混勻或搖勻?qū)?shí)驗(yàn)結(jié)果尤為重要。

6.洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在潔凈的紙巾上充分拍干，直至看不到水印。勿將紙巾放入反應(yīng)孔中吸水。

7.底物顯色液對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下，避免與金屬接觸影響結(jié)果。

8.本產(chǎn)品為一次性使用的試劑盒，請(qǐng)?jiān)谛趦?nèi)使用。

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