T7 RNA Polymerase ELISA 檢測試劑盒說明（2G）說明書

貨號：HG-TP001-2G

產(chǎn)品簡介：

本試劑盒采用雙抗夾心酶聯(lián)免疫檢測（ELISA）法，將T7 RNA Polymerase標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣本加入預(yù)包被抗T7 RNA Polymerase抗體的酶標(biāo)板，然后加入稀釋后的生物i素標(biāo)記的檢測抗體和Streptavidin-HRP，形成抗體+抗原+抗體‐Biotin+ SA‐HRP復(fù)合物，洗板后加入TMB顯色液顯色。TMB在HRP酶的催化下由無色轉(zhuǎn)化成藍(lán)色并在終止液的作用下最終轉(zhuǎn)化成黃色。黃色的深淺與樣本中被檢測到的T7 RNA Polymerase的量呈正相關(guān)。

檢測范圍：0.25 ~ 16 ng/mL
定  量  限：0.25 ng/mL
檢  測  限：0.012 ng/mL
精  密  度：CV% < 10%, RE% < 士15%

規(guī)格：

96T

應(yīng)用：

適用于生物制品純化工藝過程的優(yōu)化、中間工藝過程的雜質(zhì)控制以及終產(chǎn)品的放行檢測。

試劑盒組成：

備 注:未開封試劑盒，在2~8℃條件下有效期為12個(gè)月。

需自行準(zhǔn)備的材料

◆酶標(biāo)儀

◆去離子水

◆微孔板恒溫振蕩器

◆全新濾紙

◆微量移液器及吸頭

◆渦旋振蕩器

實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

1.所有試劑以及待測樣本需要恢復(fù)室溫（18~25°C）。所有試劑現(xiàn)配現(xiàn)用

2.1×洗液配制：濃縮洗液平衡至室溫（18~25℃），不要有結(jié)晶。混勻后根據(jù)用量，取適量去離子水按1：9的比例，將10×洗液稀釋10倍，最終得到1×洗液。

3.1×檢測抗體配制：計(jì)算實(shí)驗(yàn)所需工作液體積，取適量100×檢測抗體，用抗體稀釋液按1：99稀釋，充分混勻備用。

4.標(biāo)準(zhǔn)品的配制:取一支標(biāo)準(zhǔn)品，加200 μL去離子水，渦旋混勻，終濃度為160 ng/mL;取60uL濃度為160ng/mL標(biāo)準(zhǔn)液，加至540uL樣品稀釋液，渦旋混勻，終濃度為16ng/mL，用移液器將300uL樣品稀釋液移至每個(gè)離心管中，再按照下圖進(jìn)行1:1梯度梯度稀釋。

5. 樣品使用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋，稀釋后的樣品即為：樣品稀釋工作液。

操作步驟

使用前所有試劑組分以及待測樣本需要恢復(fù)室溫（18~25°C）。建議所有的標(biāo)準(zhǔn)品和待檢樣本進(jìn)行雙復(fù)孔測定。

1.使用前，將所有試劑充分混勻，避免產(chǎn)生氣泡。

2.根據(jù)實(shí)驗(yàn)孔數(shù)量，確定所需的板條數(shù)目，剩余板條放回鋁箔袋，密封。

3.加樣與檢測抗體工作液:每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品、樣品稀釋工作液、陰性對照至相應(yīng)孔中。每孔加1x檢測抗體50uL。用封板膜封板后置37°C恒溫震蕩培養(yǎng)箱，600-800rpm，溫育60分鐘。

4.洗滌:棄去各孔內(nèi)液體，用1x洗液注滿微孔(300 uL/孔)，靜置30秒后棄去孔內(nèi)液體;重復(fù)3次，每一次洗板完成后在濾紙上拍干。

5.顯色:每孔分別加100 μL底物顯色液，輕微振蕩混勻后用封板膜封板置25℃℃顯色15分鐘。

6.測定:每孔加終止液100 L，輕微混勻。選擇酶標(biāo)儀主波長450nm，參考波長630nm，測定各孔吸光值(OD值)。

結(jié)果處理

1.標(biāo)準(zhǔn)曲線OD處理（見下例，僅為示例，具體以實(shí)際測定為準(zhǔn)）

2.標(biāo)準(zhǔn)品理論濃度與對應(yīng)OD值以四參數(shù)進(jìn)行擬合，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線（如下圖所示）。

注意事項(xiàng)

1.樣品首i次檢測，建議進(jìn)行至少3個(gè)連續(xù)倍數(shù)的稀釋，以在標(biāo)曲范圍內(nèi)產(chǎn)生至少一個(gè)稀釋后樣品。

2.試劑按標(biāo)簽說明儲存，使用前室溫平衡。

3.包被酶標(biāo)板使用前請平衡至室溫再打開外包裝袋，實(shí)驗(yàn)中不用的板條立即放回包裝中密封，4℃可保存一個(gè)月。其他不用的試劑應(yīng)包裝好或蓋好。

4.實(shí)驗(yàn)操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。

5.使用前檢查試劑盒內(nèi)各種試劑。試劑的稀釋、加樣和終止反應(yīng)應(yīng)充分混勻或搖勻?qū)?shí)驗(yàn)結(jié)果尤為重要。

6.洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在潔凈的紙巾上充分拍干，直至看不到水印。勿將紙巾放入反應(yīng)孔中吸水。

7.底物顯色液對光敏感，避免長時(shí)間暴露于光下，避免與金屬接觸影響結(jié)果。

8.本產(chǎn)品為一次性使用的試劑盒，請?jiān)谛趦?nèi)使用。

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