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上海鯤霆生物科技有限公司

鯤霆生物|異常峰型排查及解決之拖尾峰(耗材篇)

時(shí)間:2023-8-14 閱讀:1139
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日常液相分析中,異常峰型是困擾實(shí)驗(yàn)人員的難題之一。上期我們就肩峰的處理進(jìn)行了介紹,本期我們將會(huì)對(duì)拖尾峰的排查與解決進(jìn)行討論。

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異常峰形排查及解決之肩峰(點(diǎn)擊查看)





首先,我們先要對(duì)拖尾峰進(jìn)行了解,

那么具體什么樣的峰型可以稱為拖尾峰呢?

2020版中國藥典四部0512高效液相色譜法對(duì)拖尾因子(T)有所定義。


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當(dāng)以峰高作定量參數(shù)時(shí),除另有規(guī)定外,T值應(yīng)在0.95~1.05之間。以峰面積作定量參數(shù)時(shí),一般的峰拖尾或前伸不會(huì)影響峰面積積分,但嚴(yán)重拖尾會(huì)影響基線和色譜峰起止的判斷和峰面積積分的準(zhǔn)確性,此時(shí)應(yīng)在品種正文項(xiàng)下對(duì)拖尾因子作出規(guī)定。這時(shí)我們發(fā)現(xiàn),2020版中國藥典對(duì)于拖尾峰有兩種情況,一種為峰高定量,另一種為峰面積定量,各有不同解釋。



藥典內(nèi)容


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—節(jié)選自2020版中國藥典二部抑制肽

(圖片來源網(wǎng)絡(luò))



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國家藥典委對(duì)于2025版中國藥典0512高效液相色譜法修訂草案也已公示,其中明確規(guī)定了拖尾因子的范圍。原文如下:除另有規(guī)定外,在檢查和含量測(cè)定項(xiàng)下,以峰面積作定量參數(shù)時(shí),T值應(yīng)在0.8~1.8之間;以峰高作定量參數(shù)時(shí), T值應(yīng)在0.95~1.05之間。以峰面積作定量參數(shù)時(shí),一般的峰拖尾或前伸不會(huì)影響峰面積積分,但嚴(yán)重拖尾會(huì)影響基線和色譜峰起止的判斷和峰面積積分的準(zhǔn)確性,此時(shí)應(yīng)在品種正文項(xiàng)下對(duì)拖尾因子予以規(guī)定。(圖片來源網(wǎng)絡(luò)





那么當(dāng)我們發(fā)現(xiàn)日常分析中拖尾因子

不符合藥典規(guī)定時(shí)該如何處理呢?

我們可以按照以下原因進(jìn)行排查。

流動(dòng)相及試劑

① 流動(dòng)相pH

當(dāng)流動(dòng)相pH處于化合物pKa附近時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)化合物處于離子態(tài)與分子態(tài)共同出現(xiàn)的情況,此時(shí)可能出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象??梢钥紤]將流動(dòng)相pH調(diào)整至化合物pKa±2的范圍以避免此類現(xiàn)象。


② 進(jìn)樣溶劑

當(dāng)進(jìn)樣溶劑洗脫強(qiáng)度強(qiáng)于初始比例流動(dòng)相時(shí),可能出現(xiàn)溶劑效應(yīng)。拖尾峰是溶劑效應(yīng)的現(xiàn)象之一。可以考慮使用初始比例流動(dòng)相作為進(jìn)樣溶劑,或使用溶劑效應(yīng)消除器。

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HPLC分析中溶劑效應(yīng)成因及解決方案(點(diǎn)擊查看)


樣品問題

①雜質(zhì)

樣品中混有雜質(zhì)干擾化合物峰型,導(dǎo)致出現(xiàn)峰拖尾情況。可以考慮前處理中對(duì)雜質(zhì)進(jìn)行去除,或是調(diào)整分析方法分離雜質(zhì)。


②樣品過載

樣品進(jìn)樣量過高導(dǎo)致過載時(shí)也可能產(chǎn)生拖尾情況??梢钥紤]降低進(jìn)樣量,或?qū)悠愤m當(dāng)稀釋。


色譜柱

①封端不充分

封端不充分或不封端的色譜柱,在分析堿性化合物時(shí)常會(huì)發(fā)生拖尾現(xiàn)象,其原因是樣品與色譜柱硅膠顆粒表面上的酸性或離子化硅羥基之間發(fā)生相互作用導(dǎo)致拖尾。此時(shí)可以考慮更換為封端更為完善的色譜柱或者是添加掃尾劑三乙胺等添加劑優(yōu)化峰型。


②篩板堵塞

當(dāng)色譜柱篩板堵塞時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象,主要是因?yàn)榛衔餆o法同時(shí)穿過篩板,出現(xiàn)了前后不同的通過時(shí)間,導(dǎo)致譜峰擴(kuò)散拖尾??梢钥紤]進(jìn)行色譜柱沖洗以及加裝固體顆粒物過濾部件。。


③柱效降低

當(dāng)色譜柱長時(shí)間使用后,色譜柱柱效逐漸下降是拖尾發(fā)生的原因之一??梢钥紤]進(jìn)行色譜柱沖洗或更換新柱。

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液相色譜柱沖洗與維護(hù)(點(diǎn)擊查看)



關(guān)于我們 | 鯤霆生物

上海鯤霆生物科技有限公司深耕生物醫(yī)藥行業(yè)多年,自創(chuàng)立之初就以為生物醫(yī)藥企業(yè)提供從研發(fā)分析到工業(yè)生產(chǎn)的整體化服務(wù)為愿景。不斷鉆研色譜分析及制備技術(shù),提升服務(wù)品質(zhì),致力于成為值得信賴的色譜技術(shù)服務(wù)提供商。


鯤霆生物現(xiàn)為Nouryon旗下品牌 Kromasil液相色譜柱及制備填料中國區(qū)總代理。主營業(yè)務(wù)為代理銷售各類實(shí)驗(yàn)室精密儀器、試劑耗材以及相關(guān)領(lǐng)域的技術(shù)開發(fā)與咨詢服務(wù)。


鯤霆生物愿與您攜手同行,共同前進(jìn),為更健康,更安全的生物醫(yī)藥而不懈努力。



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