對比脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染、電穿孔法及病毒載體法對原代人臍靜脈內(nèi)皮細胞（HUVECs）的轉(zhuǎn)染效率、細胞存活率及肌動蛋白表達水平的影響，優(yōu)化轉(zhuǎn)染策略。結果顯示，電穿孔法轉(zhuǎn)染效率高（82.3%），但細胞存活率較低（65.1%）；脂質(zhì)體法綜合表現(xiàn)最佳。研究為內(nèi)皮細胞基因功能研究提供了方法學參考。
內(nèi)皮細胞在血管生成、炎癥反應及屏障功能中發(fā)揮關鍵作用，其肌動蛋白骨架的動態(tài)調(diào)控是研究熱點之一。質(zhì)粒轉(zhuǎn)染技術是探究基因功能的核心手段，但內(nèi)皮細胞因分化程度高、增殖緩慢，轉(zhuǎn)染效率普遍偏低。目前常用方法包括脂質(zhì)體介導、電穿孔及病毒載體法，但不同方法對細胞活性及目標蛋白表達的影響尚未系統(tǒng)評估。
原代HUVECs為模型，構建攜帶綠色熒光蛋白（GFP）標簽的β-actin表達質(zhì)粒，通過對比三種轉(zhuǎn)染方法的效率及細胞適應性，結合蛋白表達定量分析，為內(nèi)皮細胞基因操作提供優(yōu)選方案。
細胞來源：原代人臍靜脈內(nèi)皮細胞（HUVECs），傳代3-5代用于實驗。
質(zhì)粒構建：pEGFP-C1載體插入β-actin編碼序列，經(jīng)威尼德分子雜交儀驗證插入正確性。
主要試劑：某試劑脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑、某試劑病毒包裝系統(tǒng)、某試劑細胞培養(yǎng)基。
儀器設備：威尼德電穿孔儀（參數(shù)范圍：100-300 V，脈沖時長1-10 ms）、威尼德紫外交聯(lián)儀（能量密度0.5 J/cm2）、熒光倒置顯微鏡、流式細胞儀。
分組設置：
脂質(zhì)體組：質(zhì)粒:試劑=1:3（μg:μL），孵育時間4 h；
電穿孔組：電壓200 V，脈沖時長5 ms；
病毒載體組：MOI=50，感染時間48 h。
檢測指標：轉(zhuǎn)染效率（GFP陽性率）、細胞存活率（CCK-8法）、β-actin表達量（Western blot）。
3.1 細胞培養(yǎng)與質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
HUVECs接種于6孔板（密度1×10?/孔），達80%匯合時進行轉(zhuǎn)染。
脂質(zhì)體法：質(zhì)粒與某試劑按比例混合，室溫靜置20 min后加入細胞，4 h后更換培養(yǎng)基。
電穿孔法：細胞懸液與質(zhì)?；旌虾筠D(zhuǎn)移至威尼德電穿孔儀專用電擊杯，參數(shù)設置為200 V/5 ms。
病毒法：預感染前24 h更換含某試劑Polybrene（6 μg/mL）的培養(yǎng)基，加入病毒液后離心（1000×g，30 min）。
3.2 檢測與分析
轉(zhuǎn)染效率：轉(zhuǎn)染后48 h，流式細胞儀檢測GFP陽性細胞比例。
細胞活性：CCK-8試劑孵育2 h，酶標儀測定450 nm吸光度。
蛋白表達：裂解細胞后，威尼德紫外交聯(lián)儀交聯(lián)蛋白樣品，Western blot檢測β-actin條帶灰度值。
電穿孔組GFP陽性率最高（82.3±3.1%），顯著高于脂質(zhì)體組（68.5±2.7%）和病毒組（75.2±4.0%）（P<0.05）。
電穿孔法導致細胞存活率顯著下降（65.1±5.3%），脂質(zhì)體組（89.2±3.8%）與病毒組（83.6±4.1%）存活率較高。
病毒載體組β-actin表達量最高（較對照組提升3.2倍），電穿孔組次之（2.8倍），脂質(zhì)體組低（2.1倍）。
電穿孔法雖效率突出，但高電壓易損傷細胞膜完整性，導致活性下降，適用于對細胞數(shù)量要求不高的瞬時表達實驗；脂質(zhì)體法操作簡便且兼容性佳，適合長期基因表達研究；病毒法依賴感染效率，需嚴格生物安全管控。
β-actin過表達可能改變細胞遷移與屏障功能，本研究通過優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件，為后續(xù)功能實驗奠定基礎。
電穿孔法適用于高轉(zhuǎn)染效率需求的短期實驗，脂質(zhì)體法在平衡效率與細胞活性方面更具優(yōu)勢。研究結果為內(nèi)皮細胞基因操作提供了適配不同實驗場景的方法選擇依據(jù)。
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