久久久久亚洲精品男人的天堂,日本韩国男男作爱GAYWWW,特黄AAAAAAA片免费视频,av天堂电影网

您好, 歡迎來到化工儀器網(wǎng)

| 注冊| 產(chǎn)品展廳| 收藏該商鋪

15614103871

technology

首頁   >>   技術(shù)文章   >>   攻克前白蛋白 cDNA 克隆與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染株

威尼德生物科技(北京)有...

立即詢價

您提交后,專屬客服將第一時間為您服務(wù)

攻克前白蛋白 cDNA 克隆與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染株

閱讀:218      發(fā)布時間:2025-2-5
分享:

引言

前白蛋白(PA),又稱前清蛋白,是一種由肝臟細胞合成的糖蛋白,分子量約為55kD,血漿半衰期為1.9天。因其電泳遷移速度在白蛋白之前而得名。PA在肝功能評價、肝病診斷及預(yù)后判斷中具有重要價值。各種類型肝病的PA水平均低于正常水平,且肝病越嚴重,血清PA水平越低。此外,PA還作為一種急性時相反應(yīng)蛋白,可用于炎癥反應(yīng)的監(jiān)測,以及營養(yǎng)不良、消耗性疾病、腎病和妊娠等疾病的診療。

然而,天然PA的來源有限,且提取過程復(fù)雜,難以滿足大規(guī)模生產(chǎn)和應(yīng)用的需求。因此,通過基因工程技術(shù)生產(chǎn)PA成為研究熱點。本研究旨在克隆前白蛋白cDNA,并構(gòu)建穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株,為實現(xiàn)PA的規(guī)?;a(chǎn)奠定基礎(chǔ)。

構(gòu)建前白蛋白cDNA的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株具有多方面的重要意義。首先,穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株能夠在較長時間內(nèi)維持基因表達的一致性,這對于生產(chǎn)生物制品的批間差異控制至關(guān)重要。其次,穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株的構(gòu)建有助于深入研究PA的功能和調(diào)控機制,為相關(guān)疾病的診斷和治療提供新的思路和方法。最后,穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株的建立也是實現(xiàn)PA基因工程產(chǎn)品產(chǎn)業(yè)化的重要步驟。

材料與方法

  1. 實驗材料

    • 人胚肝組織總RNA:作為模板用于RT-PCR擴增前白蛋白cDNA。

    • pGEM-T Easy載體:用于前白蛋白cDNA的初步克隆。

    • pCDNA3.1(+)載體:用于構(gòu)建真核表達重組體。

    • Hela細胞:作為宿主細胞用于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。

    • 某試劑:用于RT-PCR、DNA克隆、質(zhì)粒提取、細胞培養(yǎng)等實驗。

    • 威尼德電穿孔儀:用于細胞轉(zhuǎn)染過程中的電穿孔操作(本研究未采用電穿孔法,但提及以展示完整儀器信息)。

    • G418抗生素:用于篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株。

  2. 實驗方法

    • 前白蛋白cDNA的克隆:以人胚肝組織總RNA為模板,通過RT-PCR擴增全長前白蛋白cDNA。將擴增產(chǎn)物克隆到pGEM-T Easy載體中,進行測序驗證。

    • 真核表達重組體的構(gòu)建:將測序正確的前白蛋白cDNA亞克隆到pCDNA3.1(+)載體中,構(gòu)建真核表達重組體pCDNA3.1(+)-PA。通過限制性內(nèi)切酶消化和DNA序列分析鑒定重組體的正確性。

    • 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株的構(gòu)建:利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)將真核表達重組體pCDNA3.1(+)-PA導(dǎo)入Hela細胞。通過G418抗生素篩選獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株。

    • 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株的鑒定:通過RT-PCR和Western blot檢測穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株中前白蛋白基因和蛋白的表達情況。

實驗結(jié)果

  1. 前白蛋白cDNA的克隆與測序

    通過RT-PCR成功擴增了全長前白蛋白cDNA,并將其克隆到pGEM-T Easy載體中。測序結(jié)果顯示,克隆的前白蛋白cDNA序列與預(yù)期序列一致,無突變或缺失。

  2. 真核表達重組體的構(gòu)建與鑒定

    將測序正確的前白蛋白cDNA亞克隆到pCDNA3.1(+)載體中,構(gòu)建了真核表達重組體pCDNA3.1(+)-PA。通過限制性內(nèi)切酶消化和DNA序列分析,確認重組體構(gòu)建正確。

  3. 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株的構(gòu)建與篩選

    利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)將真核表達重組體pCDNA3.1(+)-PA導(dǎo)入Hela細胞。通過G418抗生素篩選,成功獲得了穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株。篩選過程中,觀察到細胞形態(tài)良好,生長速度正常。

  4. 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株的鑒定

    通過RT-PCR檢測穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株中前白蛋白基因的表達情況。結(jié)果顯示,穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株中前白蛋白基因表達水平顯著高于未轉(zhuǎn)染細胞。同時,通過Western blot檢測穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株中前白蛋白蛋白的表達情況。結(jié)果顯示,穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株能夠高效表達前白蛋白蛋白。

討論

  1. 前白蛋白cDNA克隆與測序的準確性

    本研究以人胚肝組織總RNA為模板,通過RT-PCR成功擴增了全長前白蛋白cDNA。測序結(jié)果顯示,克隆的前白蛋白cDNA序列與預(yù)期序列一致,無突變或缺失。這保證了后續(xù)實驗的穩(wěn)定性和可靠性。

  2. 真核表達重組體構(gòu)建的策略

    本研究選擇了pCDNA3.1(+)載體作為真核表達載體。該載體具有高效的啟動子和增強子元件,能夠驅(qū)動外源基因在真核細胞中的高效表達。同時,該載體還具有方便的克隆位點和篩選標記,便于后續(xù)的實驗操作。

  3. 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株構(gòu)建的方法與優(yōu)化

    本研究采用了脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)將真核表達重組體導(dǎo)入Hela細胞。脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)具有操作簡便、轉(zhuǎn)染效率高等優(yōu)點。在篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株的過程中,通過優(yōu)化G418抗生素的濃度和篩選時間,成功獲得了生長良好、表達穩(wěn)定的細胞株。

  4. 研究的創(chuàng)新與應(yīng)用前景

    本研究的創(chuàng)新之處在于成功構(gòu)建了前白蛋白cDNA的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株,為實現(xiàn)前白蛋白的規(guī)?;a(chǎn)提供了堅實基礎(chǔ)。該穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株具有生長速度快、表達水平高、遺傳穩(wěn)定性好等優(yōu)點,可廣泛應(yīng)用于前白蛋白的工業(yè)化生產(chǎn)、功能研究和疾病診斷等領(lǐng)域。此外,該研究成果還可為其他基因工程產(chǎn)品的生產(chǎn)提供借鑒和參考。

    在應(yīng)用前景方面,前白蛋白作為一種重要的生物標志物和藥物靶點,在肝病診斷、炎癥反應(yīng)監(jiān)測以及營養(yǎng)不良、消耗性疾病等疾病的診療中具有廣闊的應(yīng)用前景。通過構(gòu)建穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株實現(xiàn)前白蛋白的規(guī)?;a(chǎn),有望降低生產(chǎn)成本,提高生產(chǎn)效率,滿足臨床和科研需求。

結(jié)論

本研究成功克隆了前白蛋白cDNA,并構(gòu)建了真核表達重組體pCDNA3.1(+)-PA。通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)成功將其導(dǎo)入Hela細胞,建立了穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株。該穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株能夠高效表達前白蛋白蛋白,為前白蛋白的工業(yè)化生產(chǎn)提供了堅實基礎(chǔ)。本研究成果不僅具有理論意義,還具有重要的應(yīng)用價值,有望為前白蛋白的相關(guān)研究和應(yīng)用開辟新的道路。


會員登錄

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗證碼

收藏該商鋪

標簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個,單個標簽最多10個字符)

常用:

提示

您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復(fù)您~
在線留言
国产成人综合亚洲AV| 亚洲制服丝袜中文字幕自拍| 在线亚洲欧美+日本专区| 方碧如老师| 日本三级丰满人妻| 成人午夜福利免费体验区| 中文字幕日韩欧美一区二区三区| 黑人巨大精品欧美一区二区免费| 亚洲∧v久久久无码精品| 亚洲欧美一区二区三区在线| 欧美一区二区三区四区乱码| 国产一区二区三区乱码在线观看| 精品无码AV无码免费专区| 中国大陆女rapper18岁欢迎您免费| 亚洲色欲色欲WWW成人网| 欧美激情在线播放| 久久亚洲AV成人网站玖玖| 少妇人妻在线无码天堂视频网| 99国产精品永久免费视频| 免费看男人j放进女人j免费看| 国产午夜福利不卡在线观看| 婷婷五月综合色视频| 欧美在线a| 91福利免费在线看| 免费韩国美女爽快一级毛片| 日本不卡免费高清视频| 久热精品视频在线观看99小说| 国产欧美日韩免费| 99国精品午夜福利视频不卡99| 久久青青草原精品老司机| 波多野结衣超清无码中文影片| 免费高清欧美一区二区视频| 美丽的小蜜桃| 欧美国产精品粉嫩在线播放| 99久久国产宗和精品1上映| 国产精品久久久久久亚洲小说| 亚洲无码在线观看网址| 欧美日韩一区二区三区久久| 国产欧美亚洲精品第二区首页| 亚洲精品欧美综合二区| 好大好硬好爽免费视频中文|