久久久久亚洲精品男人的天堂,日本韩国男男作爱GAYWWW,特黄AAAAAAA片免费视频,av天堂电影网

您好, 歡迎來(lái)到化工儀器網(wǎng)

| 注冊(cè)| 產(chǎn)品展廳| 收藏該商鋪

15614103871

technology

首頁(yè)   >>   技術(shù)文章   >>   基于豬尾組織培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)染研究

威尼德生物科技(北京)有...

立即詢價(jià)

您提交后,專屬客服將第一時(shí)間為您服務(wù)

基于豬尾組織培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)染研究

閱讀:237      發(fā)布時(shí)間:2025-1-23
分享:

摘要

本研究采用豬尾小組織塊貼壁培養(yǎng)法成功分離培養(yǎng)出原代豬成纖維細(xì)胞,并進(jìn)行了不同時(shí)期的綠色熒光蛋白(GFP)陽(yáng)性質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效率的研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,原代細(xì)胞具有較高的轉(zhuǎn)染效率,且傳代和復(fù)蘇細(xì)胞亦能成功轉(zhuǎn)染。該研究為豬成纖維細(xì)胞的基因編輯和體細(xì)胞克隆提供了有價(jià)值的參考。

引言

成纖維細(xì)胞作為重要的供體細(xì)胞之一,在醫(yī)學(xué)、動(dòng)物科學(xué)及基礎(chǔ)研究中具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。在醫(yī)學(xué)上,成纖維細(xì)胞可用于疾病診斷、人工皮膚制備、組織創(chuàng)傷修復(fù)及組織器官培養(yǎng)等方面。在動(dòng)物科學(xué)領(lǐng)域,成纖維細(xì)胞則可用于體細(xì)胞克隆及轉(zhuǎn)基因研究,以實(shí)現(xiàn)瀕危畜禽的保種及擴(kuò)繁、優(yōu)良品種的快速繁育及轉(zhuǎn)基因新品種的培育。此外,在基礎(chǔ)研究中,成纖維細(xì)胞為遺傳學(xué)、細(xì)胞學(xué)、胚胎學(xué)、組織學(xué)及免疫學(xué)等提供了基礎(chǔ)材料和分離培養(yǎng)模式。

鑒于成纖維細(xì)胞的重要性,建立一種快速、實(shí)用、簡(jiǎn)便的豬成纖維細(xì)胞分離培養(yǎng)方法顯得尤為重要。豬尾小組織塊貼壁培養(yǎng)法作為一種有效的分離培養(yǎng)方法,具有操作簡(jiǎn)便、細(xì)胞分裂增殖能力強(qiáng)、適應(yīng)性好及性狀穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)。然而,關(guān)于該方法分離出的成纖維細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率研究尚不充分。因此,本研究旨在通過(guò)豬尾小組織塊貼壁培養(yǎng)法分離培養(yǎng)出原代豬成纖維細(xì)胞,并探究其不同時(shí)期的GFP陽(yáng)性質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效率,為豬成纖維細(xì)胞的基因編輯和體細(xì)胞克隆提供理論依據(jù)和技術(shù)支持。

材料與方法

1. 材料

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選用新生小豬,超凈工作臺(tái)、威尼德電穿孔儀、超低溫冰箱、CO2培養(yǎng)箱、眼科剪、培養(yǎng)瓶、離心管、血球計(jì)數(shù)板等儀器,以及乙醇、PBS溶液、某品牌DMEM培養(yǎng)基、胎牛血清(FBS)、中性蛋白酶、胰蛋白酶、青霉素、鏈霉素、臺(tái)盼藍(lán)、EDTA、DMSO等試劑。

2. 方法

2.1 豬尾小組織塊貼壁培養(yǎng)法分離培養(yǎng)成纖維細(xì)胞

新生小豬出生后立即取其尾尖組織,以75%酒精擦拭消毒后,用手術(shù)剪刀剪下約2cm長(zhǎng)的豬尾組織,投入75%酒精中浸泡60秒后,以無(wú)菌PBS沖洗3次,轉(zhuǎn)移至含有15%FBS的某品牌DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基中,置于冰盒后帶回實(shí)驗(yàn)室。在安全柜內(nèi),用PBS(含雙抗)洗滌豬尾組織數(shù)次后,剪下長(zhǎng)約1.5cm的組織塊,轉(zhuǎn)移至另一無(wú)菌直徑為10cm的玻璃培養(yǎng)皿中,加入幾滴血清后以彎頭手術(shù)剪刀剪碎至1mm3小塊。加入20mL消化緩沖液,放入39℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中進(jìn)行消化。消化后的組織塊貼壁培養(yǎng)于含有10%FBS的某品牌DMEM培養(yǎng)基中,定期觀察并更換培養(yǎng)基。待細(xì)胞生長(zhǎng)至80%-90%匯合時(shí),進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

2.2 細(xì)胞凍存與復(fù)蘇

選擇生長(zhǎng)狀態(tài)良好的細(xì)胞進(jìn)行凍存。將細(xì)胞用胰蛋白酶消化后,離心收集細(xì)胞沉淀,加入含有10%DMSO和90%FBS的凍存液,混勻后分裝至凍存管中,置于-80℃冰箱過(guò)夜后,轉(zhuǎn)移至液氮罐中長(zhǎng)期保存。復(fù)蘇時(shí),將凍存管從液氮罐中取出,迅速置于37℃水浴中解凍,將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)入含有10%FBS的某品牌DMEM培養(yǎng)基中,培養(yǎng)至細(xì)胞貼壁后更換新鮮培養(yǎng)基。

2.3 GFP陽(yáng)性質(zhì)粒轉(zhuǎn)染

采用威尼德電穿孔儀進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染。將細(xì)胞消化后計(jì)數(shù),調(diào)整細(xì)胞密度至1×10^6個(gè)/mL。取100μL細(xì)胞懸液與適量GFP陽(yáng)性質(zhì)?;靹蚝螅尤腚姶┛妆?。設(shè)置電穿孔參數(shù)為電壓1200V/cm,脈沖時(shí)間3ms。電轉(zhuǎn)染后,將細(xì)胞轉(zhuǎn)入含有10%FBS的某品牌DMEM培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)。分別在轉(zhuǎn)染后24小時(shí)和48小時(shí),采用熒光顯微鏡和流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞的GFP質(zhì)粒陽(yáng)性表達(dá)率。

結(jié)果

1. 豬尾小組織塊貼壁培養(yǎng)法分離培養(yǎng)成纖維細(xì)胞

采用豬尾小組織塊貼壁培養(yǎng)法成功分離培養(yǎng)出原代豬成纖維細(xì)胞。細(xì)胞形態(tài)呈多邊形,生長(zhǎng)均勻,貼壁良好。原代細(xì)胞活力很高,細(xì)胞存活率達(dá)到97.670%。經(jīng)過(guò)傳代培養(yǎng)后,細(xì)胞存活率仍為95.670%。復(fù)蘇后的細(xì)胞存活率亦在90%以上,且能保持原代細(xì)胞的生物學(xué)特性。原代培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)和復(fù)蘇培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線均呈“S"型,但復(fù)蘇細(xì)胞的生長(zhǎng)速度略微緩慢。

2. GFP陽(yáng)性質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效率

原代培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)和復(fù)蘇培養(yǎng)細(xì)胞在電轉(zhuǎn)染后均能成功表達(dá)GFP質(zhì)粒。轉(zhuǎn)染后24小時(shí),熒光顯微鏡即可檢測(cè)到GFP質(zhì)粒陽(yáng)性表達(dá)的成纖維細(xì)胞。轉(zhuǎn)染后48小時(shí),流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示原代細(xì)胞陽(yáng)性率為8.01%,稍高于傳代細(xì)胞的7.91%和復(fù)蘇細(xì)胞的7.86%。復(fù)蘇細(xì)胞存活率有所下降,轉(zhuǎn)染后細(xì)胞活力亦有所降低,但轉(zhuǎn)染后仍可得到7.86%的GFP質(zhì)粒陽(yáng)性表達(dá)率。

討論

1. 豬尾小組織塊貼壁培養(yǎng)法的優(yōu)勢(shì)

本研究采用豬尾小組織塊貼壁培養(yǎng)法成功分離培養(yǎng)出原代豬成纖維細(xì)胞。該方法操作簡(jiǎn)便,對(duì)細(xì)胞損傷小,且細(xì)胞分裂增殖能力強(qiáng),適應(yīng)性好,性狀穩(wěn)定。此外,該方法還能模擬體內(nèi)生長(zhǎng)狀況,簡(jiǎn)化生長(zhǎng)環(huán)境,明確生長(zhǎng)條件,便于施加實(shí)驗(yàn)因素及獲得直接活體觀察結(jié)果。因此,豬尾小組織塊貼壁培養(yǎng)法在豬成纖維細(xì)胞的分離培養(yǎng)中具有廣泛應(yīng)用前景。

2. 轉(zhuǎn)染效率的影響因素

原代細(xì)胞為混雜細(xì)胞,且比較脆弱、不穩(wěn)定,因此其轉(zhuǎn)染條件無(wú)法沿用純化建系的細(xì)胞。本研究在電轉(zhuǎn)染過(guò)程中,對(duì)電壓和脈沖時(shí)間進(jìn)行了優(yōu)化。結(jié)果顯示,在電壓1200V/cm、脈沖時(shí)間3ms的條件下,細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率高。此外,GFP陽(yáng)性質(zhì)粒的濃度對(duì)原代細(xì)胞的電轉(zhuǎn)染率影響較小,當(dāng)其濃度達(dá)到一定值后,轉(zhuǎn)染率間無(wú)顯著差異。這一結(jié)果與傳代細(xì)胞系相似。

3. 研究的創(chuàng)新與應(yīng)用前景

本研究的創(chuàng)新之處在于采用豬尾小組織塊貼壁培養(yǎng)法成功分離培養(yǎng)出原代豬成纖維細(xì)胞,并探究了其不同時(shí)期的GFP陽(yáng)性質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效率。研究結(jié)果為豬成纖維細(xì)胞的基因編輯和體細(xì)胞克隆提供了有價(jià)值的參考。在應(yīng)用前景方面,該方法可用于轉(zhuǎn)基因豬的制備、疾病模型的建立以及瀕危畜禽的保種及擴(kuò)繁等領(lǐng)域。此外,該方法還可為其他物種成纖維細(xì)胞的分離培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染效率研究提供借鑒和參考。


會(huì)員登錄

請(qǐng)輸入賬號(hào)

請(qǐng)輸入密碼

=

請(qǐng)輸驗(yàn)證碼

收藏該商鋪

標(biāo)簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)

常用:

提示

您的留言已提交成功!我們將在第一時(shí)間回復(fù)您~
在線留言
成年人黄色小视频| 韩国电影理论妈妈的朋友| 亚洲国产精品综合久久网各 | 麻豆国产尤物AV尤物在线观看| 国产内射爽爽大片视频社区在线| 粉色视频在线播放| 精品久久久久久无码中文字幕一区| 日韩在线看片中文字幕不卡| 久久精品国产亚洲AV无码麻豆| 极品美女扒开粉嫩小泬图片| 精品欧美日韩一区二区三区| 曰韩无码二三区中文字幕| 天天爽夜夜爽夜夜爽精品视频| 中文字幕亚洲欧美日韩在线不卡| 亚洲一欧洲中文字幕在线| 亚洲香蕉综合在人在线时看| 精品久久免费一区二区三区四区| 日韩欧美一区久久| 午夜性刺激免费视频观看不卡专区| 亚洲中文字幕久久精品无码VA| 欧美亚洲精品专区| 99热精品国产三级在线观看| 入禽太深免费视频| 99国产成人综合久久精品| 18禁裸男晨勃露J毛免费观看| 国产精品日本一区二区不卡视频| 日韩高清一区| 激情综合五月久久中文字幕| 国产精品一卡二卡三卡,| 久久精品国产精品国产精品污| 爆乳2把你榨干哦OVA在线观看| 女人被躁到高潮嗷嗷叫游戏| 亚洲国产av二区| avtt在线播放| JIZZ国产精品| 亚洲国产成人字幕久久| 亚洲AV无码乱码国产麻豆| 年轻的母亲6韩国| 视频一区视频二区制服丝袜| 国产精品国产三级欧美二区| 亚洲高清美女一区二区三区|