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大腸桿菌 XL1-Blue 菌株。

質(zhì)粒 DNA。

電轉(zhuǎn)化儀及配套的電擊杯。

培養(yǎng)基等常規(guī)實(shí)驗(yàn)試劑。

細(xì)胞培養(yǎng)：將大腸桿菌 XL1-Blue 菌株接種于適宜的培養(yǎng)基中，在特定條件下培養(yǎng)至不同的生長(zhǎng)階段。

制備感受態(tài)細(xì)胞：收集處于特定生長(zhǎng)階段的細(xì)胞，通過適當(dāng)?shù)奶幚矸椒ㄖ苽涓惺軕B(tài)細(xì)胞。

電轉(zhuǎn)化操作：將不同量的質(zhì)粒 DNA 與感受態(tài)細(xì)胞混合，放入電擊杯中。設(shè)置不同的電轉(zhuǎn)化參數(shù)，如電場(chǎng)強(qiáng)度、脈沖時(shí)間等，進(jìn)行電轉(zhuǎn)化操作。

轉(zhuǎn)化后處理：將電擊后的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至復(fù)蘇培養(yǎng)基中，在適宜條件下培養(yǎng)一段時(shí)間，使細(xì)胞恢復(fù)并表達(dá)外源基因。

轉(zhuǎn)化效率測(cè)定：通過平板計(jì)數(shù)法或其他合適的方法測(cè)定轉(zhuǎn)化后的細(xì)胞數(shù)量，計(jì)算轉(zhuǎn)化效率。

當(dāng)電場(chǎng)強(qiáng)度較低時(shí)，細(xì)胞膜上形成的微孔較少且較小，外源 DNA 難以進(jìn)入細(xì)胞，導(dǎo)致轉(zhuǎn)化效率較低。

隨著電場(chǎng)強(qiáng)度的增加，微孔數(shù)量和大小增加，轉(zhuǎn)化效率逐漸提高。但當(dāng)電場(chǎng)強(qiáng)度過高時(shí)，會(huì)對(duì)細(xì)胞造成嚴(yán)重的損傷，導(dǎo)致細(xì)胞死亡，從而降低轉(zhuǎn)化效率。

較短的脈沖時(shí)間可能不足以使外源 DNA 充分進(jìn)入細(xì)胞，而較長(zhǎng)的脈沖時(shí)間則可能對(duì)細(xì)胞造成過度損傷。

存在一個(gè)適宜的脈沖時(shí)間范圍，在此范圍內(nèi)轉(zhuǎn)化效率較高。

處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞通常具有較高的轉(zhuǎn)化效率，因?yàn)榇藭r(shí)細(xì)胞代謝活躍，細(xì)胞膜的通透性較好。

而處于靜止期或老化期的細(xì)胞轉(zhuǎn)化效率較低。

質(zhì)粒 DNA 的質(zhì)量和濃度、電擊杯的清潔度等因素也可能對(duì)轉(zhuǎn)化效率產(chǎn)生影響。