一、物理破碎法
1. 超聲波破碎法
利用超聲波的空化效應(yīng)和機(jī)械振動(dòng)破壞細(xì)胞膜，釋放蛋白質(zhì)。適用于細(xì)菌、培養(yǎng)細(xì)胞等，需控制功率和時(shí)間以防止蛋白質(zhì)變性。
2. 液氮研磨法
通過(guò)液氮冷凍組織后研磨成粉末，結(jié)合裂解液釋放蛋白質(zhì)，常用于植物或動(dòng)物組織（如腦、脊髓）。
3. 高壓破碎法
通過(guò)高壓迫使細(xì)胞破裂，適用于微生物和大規(guī)模提取。
二、化學(xué)溶解法
1. 洗滌劑裂解法
使用SDS、Triton X-100等去污劑溶解細(xì)胞膜，適用于細(xì)胞和組織的快速裂解。
2. 尿素/硫脲變性法
高濃度尿素（8-9 M）破壞蛋白質(zhì)非共價(jià)鍵，結(jié)合CHAPS去污劑提取疏水性蛋白，常用于雙向電泳樣本制備。
3. 三氯醋酸-丙酮沉淀法
通過(guò)TCA和丙酮沉淀蛋白質(zhì)，去除脂類及小分子雜質(zhì)，適用于植物和富脂樣本。
三、鹽析與沉淀法
1. 硫酸銨鹽析法
通過(guò)調(diào)節(jié)鹽濃度使蛋白質(zhì)沉淀，操作簡(jiǎn)單且成本低，適合初步純化。
2. 有機(jī)溶劑沉淀法
使用乙醇、丙酮等降低蛋白質(zhì)溶解度，常用于去除雜蛋白或濃縮樣本。
四、層析與過(guò)濾法
1. 親和層析法
利用目標(biāo)蛋白與配體（如Ni-NTA樹脂、抗體）的特異性結(jié)合進(jìn)行純化，選擇性高但成本較高216。
2. 凝膠過(guò)濾法
基于分子量差異分離蛋白質(zhì)，適用于去除小分子雜質(zhì)或分離不同大小的蛋白復(fù)合物。
五、特殊場(chǎng)景提取法
1. 線粒體蛋白提取
通過(guò)差速離心分離線粒體，結(jié)合裂解液（含甘露醇、EDTA）提取膜蛋白，適用于亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)研究。
2. 細(xì)菌蛋白提取
使用溶菌酶或SDS裂解細(xì)菌細(xì)胞壁，結(jié)合離心去除碎片，常用于重組蛋白表達(dá)分析。
3. 雙向電泳前處理法
針對(duì)雙向電泳優(yōu)化，采用尿素/硫脲裂解液和還原劑（DTT）保持蛋白質(zhì)溶解性，減少電荷異質(zhì)性。
六、實(shí)驗(yàn)優(yōu)化建議
樣本類型：植物組織需液氮研磨和TCA沉淀；動(dòng)物組織推薦凍融循環(huán)或勻漿法。
抑制劑使用：裂解液中需添加蛋白酶抑制劑（如PMSF、亮肽素）和還原劑（DTT）防止降解。
溫度控制：全程冰上操作，避免蛋白質(zhì)變性或酶活性損失。
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