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polyscience24765轉染步驟

閱讀:312      發(fā)布時間:2025-4-9
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了解更多,請?zhí)D→Polysciences 24765說明書

6孔板細胞培養(yǎng)轉染為例:

使用細胞培養(yǎng)液3mlDNA質粒3ug,PEI轉染試劑9ug??梢愿鶕煌毎匦?,增加DNAPEI使用量。
一、細胞培養(yǎng)

1. 轉染前24 h左右對細胞進行傳代,接種密度約為1 - 3 × 105 cells/well。細胞接種密度,大約在60%左右。

2. 過夜培養(yǎng)。
3. 吸出培養(yǎng)液,使用新鮮培養(yǎng)液清洗3-4次。然后,加入2.7 ml新鮮配置的wanquan培養(yǎng)基。因為細胞過夜生長的分泌物有可能影響轉染效率,所有建議進行細胞清洗操作。更換新鮮培養(yǎng)液,有助于轉染后的細胞表達和生長,防止細胞營養(yǎng)的不足。
    也可以不吸出培養(yǎng)液,不更換新鮮培養(yǎng)液,直接進行細胞轉染。
4. 當細胞匯合度達到60% - 80%時,轉染可以取得較高的轉染效率。
二、PEI/DNA復合物配置
1. 1.5 ml無菌離心管中加入150 μl opti-MEM無血清培養(yǎng)基,并加入3 ug DNA質粒,用移液器輕輕混勻。

2. 1.5 ml無菌離心管中加入150 μl opti-MEM無血清培養(yǎng)基,并加入9 ug PEI轉染試劑儲存液,用移液器輕輕混勻。

3. PEI-opti-MEM滴加至DNA-opti-MEM中,用移液器輕輕混勻,室溫靜置15 - 30 min后可用于轉染。注意:形成的PEI/DNA復合物溶液盡量在30 min內使用。
4. PEI/DNA復合物的形成,一定是分別在無血清培養(yǎng)基中稀釋后,再進行混勻。血清的存在會干擾復合物的形成。


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三、細胞轉染
1. PEI/DNA復合物混合液滴加至6孔板培養(yǎng)基中,輕輕晃動吹打培養(yǎng)液使PEI/DNA復合物均勻分散。
2. 過夜培養(yǎng)24-72小時。

四、初始轉染條件

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五、PEI轉染效率

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